Identificación, caracterización molecular y mutagénesis insercional de genes codificantes para antígenos proteicos de Brucella Abortus

• Autores: Boschiroli, María Laura
• Año de publicación: 1998
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Rossetti, Osvaldo Luis
• Materia: BRUCELLA ABORTUS; BRUCELOSIS BOVINA; FACTORES DE VIRULENCIA; GENES; SECUENCIA NUCLEOTIDICA; CEPAS MUTANTES; 2-OXOGLUTARICO DESHIDROGENASA; SUPEROXIDO DISMUTASA CU/ZN; FISIOLOGIA BACTERIANA; BRUCELLA ABORTUS; BOVINE BRUCELLOSIS; VIRULENCE FACTORS; GENES; NUCLEOTIDE SEQUENCE; MUTANT STRAINS; 2-OXOGLUTARATE DESHYDROGENASE; CU/ZN SUPEROXIDE DISMUTASE; BACTERIAL PHYSIOLOGY
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Brucella abortus, el agente etiológico de la brucelosis bovina, es una bacteriaintracelular que replica en células fagocíticas y que también infecta a humanos, por loque la enfermedad es considerada una zoonosis. Esta enfermedad produce grandespérdidas en el sector pecuario y de salud pública del país y del mundo. Los factoresde virulencia de esta bacteria son pobremente conocidos, y el diagnóstico de laenfermedad es aún dificultoso y poco confiable. Una manera de sobrellevar estasdificultades es por medio del estudio genético de la bacteria. En este trabajo se caracterizaron tres genes y las proteínas que éstoscodifican de B.abortus S19, la cepa vacunal bovina. La estrategia para conocer el rolen la fisiología bacteriana fue por un lado obtener la de los genes y buscarhomologías en bancos de datos, y por otro lado mutagenizartos por intercambioalélico y estudiar el comportamiento de las cepas mutantes in vivo e in vitro. Se lograron identificar genes del operón 2-oxoglutárico deshidrogenasa y laenzima superóxido dismutasa dependiente de cobre y zinc. En el primer caso, lasmutantes muestran claras diferencias con respecto a la cepa salvaje, demostrando unrol fundamental de estas proteínas en la fisiología bacteriana. En el segundo caso, lacepa mutante no muestra diferencias significativas, confirmando resultados previos,por lo que se demuestra que esta proteína no es un factor de virulencia.
Brucella abortus, the causative agent of bovine brucellosis, is an intracellularbacteria which can replicate within phagocytic cells and can also infect humans,therefore the disease is considered a zoonosis. Brucellosis produces greateconomical and public health losses not only in our country but worldwide. Brucella’svirulence factors are poorly understood, and diagnosis is difficult and unreliable. Ameans to overcome this drawbacks is studying the bacterial genetics. In this work 3 genes from Brucella abortus vaccine Strain 19, and the proteinsthey codify for, were studied. In order to understand their physiological role, genessequences were determined and compared to other known sequences in databases. On the other hand, these genes were knocked out by allelic replacement and mutantstrains’ behavior was studied in vitro and in vivo. Genes from 2-oxoglutarate dehydrogenase operon and Cu/Zn superoxidedismutase were identified. Mutants for the former genes showed clear differencescompared to the wild type strain, demonstrating an important physiological role in thebacteria. Confirming pre-existing results, mutants for the latter gene showed nosignificant differences, hence this protein is not a real virulence factor.
Fil: Boschiroli, María Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.