Cultivo primario de células testiculares prepúberes humanas : Cambios madurativos de la regulación de la esteroidogénesis

• Autores: Berensztein, Esperanza Beatriz
• Año de publicación: 1998
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Rivarola, Marco A.; Belgorosky, Alicia
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La regulación de la fase postnatal temprana de activación testicular así como de la posteriorquiescencia en humanos es poco conocida. Tanto la secreción de hormonas hipofisarias como lacomposición celular del testículo correspondiente a la fase postnatal temprana son diferentes altestículo adulto. El objetivo fundamental del presente trabajo de tesis fue desarrollar el cultivo primariode células testiculares humanas provenientes de necropsia. Se estudiaron 50 testículos de pacientesneonatales (grupo 1, G1), de la etapa de activación postnatal (G2), de la etapa de quiescenciatesticular (G3) y puberales (G4). El estudio de la secreción de testosterona (T), marcador de células de Leydig, en función del tiempo post mortem (tpm) encontró que el tpm debe ser de hasta 24 horas, yaque a tpm mayores no hay T y se activa la enzima aromatasa. Se comparó la T basal y la respuesta agonadotrofinas en los 4 grupos, hallándose que la T basal es significativamente mayor en G1 y G2 queen G3 (p<0.05) y que sólo GZ responde a gonadotrofinas. Se encontró que Ia actividad estimada delas enzimas 17β-HSD, 3β-HSD y 17,20 liasa de la P450c17, fue significativamente mayor en G2 queen G3 y que 17β-HSD y 3β-HSD están más activas que 17,20 liasa. Por análisis con precursorestritiados de las vias Δ4 y Δ5 e identificación de metabolitos producidos por cromatografía en capadelgada se observó que la vía Δ5 es preferencial en testículo humano prepúber. Se observó unaumento de T en ausencia de gonadotrofinas bajo GH en G2 y bajo IGF-1 en los 4 G. Se estudió lasecreción de inhibina-B, marcador de célula de Sertoli, encontrándose una disminución con la edaddurante la prepubertad, un aumento en paralelo a la T y un efecto estimulador de FSH. Por el métodode subcultivos y criopreservación de células testiculares humanas de necropsia, se encontró T, bajocolesterol ó pregnenolona, indicando que las enzimas esteroidogénicas están preservadas. El modeloexperimental desarrollado ha demostrado además ser útil para estudiar la fisiopatogenia de diversasalteraciones de la función testicular en los niños.
The regulation of the ear1y postnatal activation and subsequent quiescence in human testiculardevelopment is poorly understood. The secretion of pituitary hormones and the testicular cellcomposition in prepubertal are different than adult men. The main aim of this study was to develop theprimary culture of human testicular cells obtained from necropsy. A total of fifty testes was studied anddivided into: neonatal stage or group 1 (G1), postnatal activation stage (G2), stage of quiescence (G3)and pubertal stage (G4). Testosterone secretion (T), as marker of Leydig cell function, was related withpost mortem hours (pmh). It was found that pmh must be less than 24 hours, because at pmh a higher T dissapeared and aromatase activity increased. Basal T and response to gonadotrophins wereanalyzed in the 4 groups. Basal T was significantly higher in G1 and G2 than in G3 (p<0.05), and onlyin G2 an increment of T was found under LH/FSH. Seventeenβ-HSD, 3β-HSD and the 17,20 lyase of P450c17 activities were estimated in G2 and G3 and it was found that the three activities were higher in G2 than in G3, and 17β-HSD, 3β-HSD were more activated than 17,20 lyase. The analysis of the twopathways of steroidogenesis Δ5 and Δ4, studied after the incubation with radiolabeled precursors andthe identification of products by TLC, showed that the preferential pathway is the Δ5. The stimulatingeffect of factors other than gonadotrophins was studied. An increment of T under GH in G2 and under IGF-1 in the four groups in the abscence of LH/FSH was observed. Inhibin-B secretion, as marker of Sertoli cells, was studied. A negative correlation between Inhibin-B secretion and age during prepubertywas found. Moreover, a positive correlation between Inhibin-B and T and a stimulating effect of FSH on Inhibin-B secretion was also shown. Human testicular cells obtained from necropsies were subculturedand cryopreserved and their ability to secrete T was maintained, under cholesterol or pregnenolone,showing that steroidogenic enzymes were preserved. The present model of human testicular cells inculture was found to be useful to study the physiopathogenesis of some alterations of testicularfunction in boys.
Fil: Berensztein, Esperanza Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.