Estudio de la expresión de los mensajeros de las subunidades de la PKA durante el crecimiento vegetativo y la transición dimórfica en Candida albicans

• Autores: Souto, Guadalupe Inés
• Año de publicación: 2007
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Di Bernardo de Passeron, María Susana
• Materia: CANDIDA ALBICANS; PKA; CRECIMIENTO VEGETATIVO; TRANSICION DIMORFICA; NIVELES DE ARNM; 3´-RACE; SITIOS DE POLI(A); MODELOS ESTRUCTURALES; CANDIDA ALBICANS; PKA; VEGETATIVE GROWTH; DIMORPHIC TRANSITION; MRNA LEVELS; 3´-RACE; POLY(A) SITES; STRUCTURAL MODELS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En este trabajo se estudió la expresión de TPK1, TPK2 y BCY1 durante el crecimiento vegetativo y la transición dimórfica en medio líquido con NAcGlc a 37°C en distintas cepas de C. albicans. Durante el crecimiento vegetativo de la cepa parental CAI4, el patrón de expresión de TPK1 y TPK2 varió en forma similar, alcanzando su máxima expresión en la fase de crecimiento logarítmica tardía. En todos los estadios medidos los niveles del ARNm de TPK1 fueron menores a los de TPK2. Los niveles de expresión de TPK1 y TPK2 en las correspondientes mutantes de tpk, fueron similares a los de la CAI4, sugiriendo que la ausencia de una de las isoformas de C no es compensada por la sobreexpresión de la otra. Se demostró que la mayor parte de la actividad quinasa en la cepa parental es aportada por Tpk2p. Resultados de Western blot confirmaron que la expresión y/o estabilidad de BCY1 depende de la presencia de los dos genes de C. Durante la transición dimórfica, en la cepa tpk2 se observó un aumento en el nivel de expresión de TPK1 y de la actividad de PKA correlacionados con la aparición de los tubos germinativos. Además, en diferentes medios de cultivos se observó que la cepa tpk1 mostró un marcado retraso en el proceso morfogenético en comparación con las cepas CAI4 y tpk2, sugiriendo que Tpk1p sería importante para la rápida aparición de los tubos germinativos. Se observaron dos transcriptos de TPK2, uno mayoritario de 1.8 kb y uno minoritario de 1.4 kb. Mediante experimentos de 3´- RACE se determinó que ambos se originan a partir del reconocimiento de tres señales de poli(A) presentes en la región 3´UTR del gen. Finalmente, pequeñas diferencias observadas en modelos estructurales de las dos isoformas de C podrían dar cuenta de la especificidad de ambas.
In this work we studied the expression of TPK1, TPK2 and BCY1 in different strains of C. albicans during vegetative growth and during dimorphic transition in NAcGlc liquid medium at 37°C. During vegetative growth of the CAI4 parental strain, the expression profiles of TPK1 and TPK2 varied similarly, reaching maximal expression at the late logarithmic phase. TPK1 mRNA levels were lower than those of TPK2 at all stages measured. In the corresponding tpk mutants, the level of expression of TPK1 and TPK2 were similar to those of CAI4, suggesting that the loss of one catalytic isoform is not compensated by overexpression of the other. It was demonstrated that Tpk2p is responsible for most of PKA enzymatic activity in CAI4 strain. The Western blot assays confirmed that the BCY1expression and/or stability depend on the presence of both C genes. During the dimorphic transition, a sharp increase in TPK1 mRNA levels and in PKA activity correlated with the onset of germ-tube formation in strain tpk2. Moreover, we showed that tpk1 strain exhibited a delayed morphogenetic shift in comparison with CAI4 and tpk2 strains in several liquid inducing media, suggesting that Tpk1p must be important for faster germtube appearance. We observed two TPK2 transcripts, a major one of 1.8 kb and a minor one of 1.4 kb, and established by 3´-RACE that they originate from the recognition of the three polyadenylation signals present in the 3´UTR region of the gene. Finally, small differences observed in structural models of the two C isoforms could account for their specificities.
Fil: Souto, Guadalupe Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.