Regulación transcripcional del Splicing alternativo

• Autores: Kadener, Sebastián
• Año de publicación: 2002
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kornblihtt, Alberto Rodolfo
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En el presente trabajo de tesis investigamos aspectosrelacionados con el acoplamiento entre la transcripción yel splicing alternativo. Utilizando como modelo al exónalternativo EDI de la fibronectina humana, encontramos quela elongación transcripcional es un importante moduladordel splicing alternativo. El Ag T de SV40 activa lareplicación del DNA 2 veces, la transcripción entre 12 y 20veces, y es capaz de provocar un incremento de 25 veces enla inclusión del exón EDI. El efecto del Ag T es específicode exón, ocurre en cis y depende de la replicación del DNAy no de la transformación celular. VP16, un activador de lainiciación y elongación transcripcionales tiene un efectosimilar en la transcripción pero opuesto sobre el splicing:inhibe la inclusión de EDI 35 veces. Es más, esta proteínaviral es capaz de revertir el efecto del Ag T sobre elsplicing de EDI. Consistentemente se determinó que lareplicación es capaz de modificar la estructura cromatínicadel molde y de ese modo alterar la capacidad elongadora dela RNA pol II. Por otro lado, el enhancer transcripcionaldel SV4O (una secuencia capaz de aumentar la capacidadelongadora de la RNA pol II) favorece la exclusión del exón EDI en forma independiente de los niveles de RNA. De estemodo, la modulación de la capacidad elongadora de la RNApol II aparece como una nueva forma de regular el splicingalternativo. Independientemente se determinaron dos hechosde importancia: ni el sitio intranuclear de transcripción,ni el reclutamiento de proteínas de splicing por lamaquinaria transcripcional parecen tener una influenciaimportante sobre la decisión de inclusión del exón EDI enel transcripto maduro.
In this work we investigated aspects related to thecoupling between transcription and alternative splicing. Using the fibronectin alternative EDI exon as a model, wefound that th pol II elongation rate has an importantinfluence on alternative splicing. SV40 large T-antigen (T-Ag)activates template replication by only 2-fold,transcription by 12-20 fold and provokes a 25-fold increasein the inclusion of the EDI exon into mature mRNA. VP16, anactivator of transcriptional initiation and elongation, hasa similar effect on trasncription but the opposite effecton splicing: EDI inclusion is inhibited by 35-fold. Moreover, this Viral protein can revert the T-Ag effect. T-Ag-mediated replication can modify the chromatin structureof the plasmid DNA and, as a consecuence of this, caninhibit the processivity of RNA pol II. The SV40 enhancer (a sequence capable of changing the elongation rate of RNApol II) stimulates EDI exon exclusion. Then, modulation ofthe elongation rate apperars as a key mechanism to regulatealternative splicing. In addition, we found that theintranuclear transcription site and the recruitment ofsplicing proteins by the transcription machinery are notimportant for the fate of EDI inclusion in mature mRNA.
Fil: Kadener, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.