Influencia de la elongación transcripcional sobre el splicing alternativo

• Autores: Nogués, Guadalupe
• Año de publicación: 2004
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Kornblihtt, Alberto Rodolfo
• Materia: ELONGACION TRANSCRIPCIONAL; SPLICING ALTERNATIVO; TRANSCRIPTIONAL ELONGATION; ALTERNATIVE SPLICING
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El splicing alternativo de los pre-mRNAs es un mecanismo fundamental de las células eucariotas, que permite generar una gran diversidad proteica a partir de un número relativamente pequeño de genes. Desde hace unos años se sabe que las reacciones de procesamiento de los pre-mRNAs tales como la adición de una caperuza o cap en el extremo 5', el splicing de intrones, y el corte y poliadenilación en el extremo 3', no sólo ocurren cotranscripcionalmente, sino que todos estos procesos estin acoplados funcionalmente entre si. Esto llevó a proponer una posible influencia de la transcripción sobre todos ellos. En particular, nuestro grupo demostró en 1997 que si se cambian los promotores que dirigen la transcripción de un minigén de fibronectina humana, se modifica el patrón de splicing del exón alternativo EDI. En esta tesis continuamos con esta línea de investigación, y nos preguntamos si la modulación de la capacidad de la RNA polimerasa II (Pol II) de elongar a través de pausas del molde, también llamada procesividad, puede modificar el splicing alternativo de EDI. Para responder esto, estudiamos el efecto, sobre el splicing alternativo, de distintos activadores transcripcionales capaces de estimular la iniciación y/o la elongación transcriptional. Además, investigamos indirectamente la influencia del factor de elongación P-TEFb, que posee una actividad kinasa capaz de convertir la Pol II a su isoforma procesiva. Por último, examinamos la influencia de la procesividad de la Pol II en el control del splicing alternativo en relación a la fuerza de los sitios de splicing. Las evidencias obtenidas apoyan un modelo cinético de control del splicing alternativo, según el cual la transcripción mediada por una Pol II altamente procesiva favorecería la exclusión de un exón alternativo, debido probablemente a un menor reconocimiento del sitio subóptimo de splicing.
In eukaryotic cells, pre-mRNA alternative splicing is an essential mechanism that generates a large protein diversity fiom a small number of genes. For the last few years, it has been known that pre-mRNAs processing reactions such as capping, splicing, and 3'-end processing not only occur cotranscriptionally, but they are functionally coupled to each other. This suggested the possibility of transcription affecting all these processes. In particular, our group demonstrated in 1997 that swapping of the promoters that drive transcription of a human fibronectin minigene alters splicing of the ED1 alternative exon. In this thesis we continued with this subject, and we asked ourselves if changes in RNA polymerase I1 (Pol 11) ability to elongate trough pauses in the template, quality also known as processivity, can modify ED1 alternative splicing. To answer this, we studied the effect on alternative splicing of different transcriptional activators that stimulate transcriptional initiation andlor elongation. Besides, we examined indirectly the influence of the elongation factor P-TEFb, that exhibits a kinase activity that makes Pol I1 to become more processive. We also investigated the importance of Pol I1 processivity on the control of alternative splicing in relation to splice sites strength. The evidences obtained support an alternative splicing kinetic model in which transcription driven by a processive Pol I1 would favor alternative exon skipping, probably because of a poor recognition of the suboptimal splice site.
Fil: Nogués, Guadalupe. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.