Inhibidores de ciclo celular y terapia endócrina en carcinomas mamarios con distinta proporción de isoformas de receptores de progesterona

• Autores: Pataccini, Gabriela
• Año de publicación: 2023
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Lanari, Claudia Lee Malvina; Giulianelli, Sebastián
• Materia: CANCER DE MAMA; ANTIPROGESTAGENOS; INHIBIDORES DE CICLO CELULAR; EJE RB-E2F; ISOFORMAS DEL RECEPTOR DE PROGESTERONA; BREAST CANCER; ANTIPROGESTINS; CELL CYCLE INHIBITORS; RB-E2F AXIS; PROGESTERONE RECEPTORS ISOFORMS
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Aproximadamente el 70% de los carcinomas mamarios (CaM) expresan receptores de estrógeno (ER) y de progesterona (PR) y se tratan con terapia endócrina sola o en combinación con, por ejemplo, inhibidores de ciclo celular (iCDK4/6). Sin embargo, un alto porcentaje recae, por lo que es importante desarrollar nuevos agentes terapéuticos y mejorar los criterios para elegir a las pacientes que pueden responder a las distintas terapias. En el laboratorio hemos demostrado que los antiprogestágenos inhiben el crecimiento de tumores de CaM que expresan mayores niveles de isoforma A de PR (PRA) que de PRB, denominados PRA-H. Postulamos que la administración conjunta de iCDK4/6 (palbociclib, PALBO) y antiprogestágenos (mifepristona, MFP) es beneficiosa para el tratamiento de tumores luminales PRA-H. En este trabajo de tesis nos propusimos: a) Desarrollar un Biobanco de PDX de CaM humano para contar con modelos fidedignos de la enfermedad y que estén disponibles para la comunidad científica, b) Estudiar el efecto de la combinación de MFP y PALBO en el crecimiento tumoral de distintos modelos de CaM, c) Investigar el mecanismo molecular asociado al efecto terapéutico del tratamiento combinado haciendo foco en la regulación del eje RB-E2F. En este trabajo de tesis se estableció un total de 8 PDX de CaM: 2 luminales, 1 HER2+ y 5 triples negativos. Los PDX mantuvieron la expresión de marcadores con respecto al tumor parental. Se realizó una secuenciación para caracterizar el exoma de los PDX. Se evaluó in vivo y ex vivo la respuesta a distintas drogas elegidas según el subtipo tumoral de cada PDX. En particular, se evaluó in vivo la sensibilidad a PALBO y a MFP en el PDX luminal ER+ PRA-H, donde los tratamientos simples inhibieron el crecimiento tumoral. En modelos experimentales murinos sensibles a MFP y a PALBO, se demostró un efecto terapéutico beneficioso al combinar ambos fármacos. En células T47D y sus variantes T47D-YA e -YB, que expresan solo PRA o PRB respectivamente, se demostró que las 3 variantes son sensibles a PALBO, pero la combinatoria con MFP fue eficiente solo en las células que expresan PRA. El efecto inhibitorio de la proliferación celular estuvo asociado a una disminución de los niveles de pRB y de E2F1. Por último, realizamos ensayos de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) en las células T47D-YA. Observamos que el tratamiento con MFP aumenta el reclutamiento de PRA sobre regiones regulatorias del gen E2F1, demostrando una regulación directa del antiprogestágeno sobre dicho gen. Los resultados presentados en este trabajo de tesis muestran que MFP disminuye los niveles de fosforilación de RB y la expresión de E2F1 en modelos de CaM que expresan altos niveles de PRA, existiendo una convergencia a este nivel con los iCDK4/6. Esto sugiere la posibilidad de utilizar combinaciones de ambos compuestos a bajas dosis para tratar pacientes con tumores PRA>PRB, con el fin de disminuir los efectos secundarios de los iCDK4/6.
Approximately 70% of breast carcinomas (BC) express estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) and are treated with endocrine therapy alone or in combination with other therapies, such as cell cycle inhibitors (iCDK4/6). However, a high percentage of patients relapse. Thus, it is important to develop new therapeutic agents and improve the criteria for choosing patients who benefit from different therapies. Previously, we have shown that antiprogestins inhibit BC growth of tumor portraying higher levels of PR isoform A (PRA) than of PRB, called PRA-H. We postulate that co-administration of iCDK4/6 (palbociclib, PALBO) and antiprogestins (mifepristone, MFP) is beneficial for the treatment of PRA-H luminal tumors. In this thesis work we proposed to; a) develop a PDX Biobank of human BC to establish reliable models of the disease available for the scientific community, b) study the effect of the combined treatment of MFP and PALBO on tumor growth in different BC models, and c) study the molecular mechanisms associated with the therapeutic effect of the combined treatment focusing on the regulation of the RB-E2F1 axis. A total of eight BC PDX were established: 2 luminal, 1 HER2+, and 5 triple negatives. All PDX maintained the marker expression reported in the parental tumors. Exome sequencing was performed and the response to different drugs, chosen according to each PDX tumor subtype, was evaluated in vivo and ex vivo. We specifically evaluated the sensitivity to MFP and PALBO in the luminal PDX ER+ PRA-H in vivo. Both single treatments inhibited tumor growth. In experimental mouse models, a beneficial therapeutic effect was demonstrated with the combined treatment in tumors sensitive to MFP and PALBO. T47D cells and their variants T47D-YA and -YB, which express only PRA or PRB respectively, were sensitive to PALBO. The combined treatment was efficient only in cells that express PRA. The inhibitory effect on cell proliferation was associated with a decrease in pRB and E2F1 levels. Lastly, chromatin immunoprecipitation assays (ChIP) performed in T47D-YA, showed that MFP treatment increases PRA recruitment to specific regulatory regions in the E2F1 gene, demonstrating a direct regulation of antiprogestins on E2F1. The results presented in this thesis show that MFP inhibits RB phosphorylation and E2F1 levels in PRA>PRB BC models, with a convergence at this level with iCDK4/6. This suggests the possibility of using low-dose combinations of both compounds to treat patients who express higher levels of PRA than PRB, decreasing the side effects of iCDK4/6.
Fil: Pataccini, Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.