Utilización del virus X de la papa como vector de expresión transitoria en plantas

• Autores: Calamante, Gabriela
• Año de publicación: 1998
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mentaberry, Alejandro
• Materia: PVX; POTEXVIRUS; VECTOR VIRAL; VECTOR DE EXPRESION VEGETAL; PVX; POTEXVIRUS; VIRAL VECTOR; PLANT EXPRESSION VECTOR
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El virus X de la papa (PVX) es el miembro tipo del grupo potexvirus. En estetrabajo de Tesis se obtuvo una copia de ADNc completa e infectiva de PVX. Además, seevaluó la capacidad de PVX como vector de expresión transitoria en plantas. Seobtuvieron vectores virales de reemplazo e inserción capaces de expresar el genbacteriano uid A. En el primer caso, se reemplazó el gen de la cápside (CP) por el genmarcador, y se evaluó en experimentos de complementación. Sólo se observó actividadde la enzima β-glucuronidasa (GUS) en ensayos de co-inoculación con viriones de PVXpurificados. La actividad de GUS estuvo restringida a pocas células en la hoja inoculada. En el segundo caso, se obtuvo un vector de inserción donde el gen uíd A se expresó apartir de una duplicación del promotor subgenómico de CP y se observó actividad de GUS en las hojas inoculadas. También se obtuvo y evaluó un vector de inserción paraexpresar el gen del factor de crecimiento epidermal humano. Finalmente, se obtuvieronherramientas necesarias para implementar un sistema de trans-complementación entreplantas transgénicas que expresaban la replicasa de PVX y construcciones derivadas de PVX defectivas en la replicación.
Potato virus X (PVX) is the type member of the potexvirus group. In this Thesisan infections, full-length cDNA copy of PVX genome was obtained. Besides, thesuitability of PVX as a transient expression vector in plants was evaluated. Replacementand insertion viral vectors able to express the uid A bacteria] gene, was developed. Thefirst, in which the viral coat protein (CP) gene was replaced by the reporter gene, wasevaluated in complementation assays. β-glucurunidase (GUS) activity was only detectedin co-inoculation experiments with purified PVX virions. GUS activity was restricted tosmall areas of the inoculated leaves. The insertion vector was able to express uid A froma duplicated CP subgenomic promoter. GUS activity was only detected on the inoculatedleaves. The insertion vector was also used to express the human epidermal growth factorgene in tobacco plants. Finally, a trans-complementation system was designed. Transgenic tobacco plants expressing the PVX replicase gene were obtained, and fourreplication defective versions of PVX were constructed. These tools will be used in thefuture to perform complementation assays in tobacco protoplasts and plants.
Fil: Calamante, Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.