Glicobiología de Trypanosoma cruzi. Parte A : Caracterización de mucinas, aceptoras potenciales en al reacción de transsialidación. Parte B: Biosíntesis de inositolfosfoceramida y...

• Autores: Salto, María Laura
• Año de publicación: 2005
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Muchnik de Lederkremer, Rosa María
• Materia: TRYPANOSOMA CRUZI; MUCINAS; FOSFOLIPASAS; INOSITOLFOSFOCERAMIDA; FOSFOLIPIDOS; ACIDOCALCISOMAS; GALACTOFURANOSA; TRYPANOSOMA CRUZI; MUCINS; PHOSPHOLIPASES; INOSITOLPHOSPHOCERAMIDE; PHOSPHOLIPIDS; ACIDOCALCISOMES; GALACTOFURANOSE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Esta tesis contribuye al conocimiento de la estructura y biosíntesis de moléculas de Trypanosoma cruzi que están ausentes en mamíferos. Las estructuras estudiadas son: 1. Mucinas, glicoconjugados de membrana que pueden contener galactofuranosa (Galf) de acuerdo con la infectividad de la cepa. 2. Inositolfosfolípidos, en particular inositolfosfoceramida (IPC) y su “turnover” durante la diferenciación de trypomastigotes a amastigotes. El trabajo se dividió en dos partes: Parte A. Se desarrollaron procedimientos para el análisis de los oligosacáridos unidos O-glicosídicamente en mucinas de T. cruzi. Para la separación de los oligosacáridos conteniendo galactofuranosa de los de galactopiranosa se utilizó cromatografía de intercambio aniónico con detección por pulso amperométrico (HPAEC-PAD). Este método se usó para analizar las mucinas del clon CL14 de T. cruzi. En las mismas se encontró N-acetilglucosamina y β-Galp1-4GlcNAc. También se encontró, en mucinas recombinantes de epimastigotes de la cepa CL Brener, obtenidas por transfección de un gen con repeticiones en “tandem” en la región central, β-Galp1-4GlcNAc y β-Galp1-4(β-Galp1-6)GlcNAc. La ausencia de galactofuranosa en mucinas de la cepa CL está de acuerdo con su clasificación en el grupo 2 de cepas más infectivas. Parte B. Se demostró que la fosfatidilinositol fosfolipasa C (TcPI-PLC), clonada con anterioridad, fue activa sobre IPC liberando ceramida. Asimismo se demostró la asociación de fosfolipasas A1, A2, C, IPC-hidrolasa y acil transferasa con membranas de las formas infectivas, amastigotes y trypomastigotes. Estas enzimas serían responsables de reacciones de remodelamiento que tienen lugar sobre lípidos de anclas de glicoproteínas maduras y de GIPLs. La síntesis de IPC y de GIPLs fue inhibida con Aureobasidin A. El antibiótico inhibió la diferenciación de trypomastigotes a amastigotes. Los fosfolípidos de los acidocalcisomas de epimastigotes de T. cruzi se caracterizaron por espectrometría de masa con ionización por electrospray (ESI/MS). Fueron similares a los fosfolípidos de microsomas, aunque IPC no fue detectada. Los GIPLs de acidocalcisomas, no reaccionaron con un anticuerpo contra Galf. Los acidocalcisomas son almacenamientos de calcio encontrados en microorganismos y recientemente en células de mamíferos. En conclusión, en esta tesis se confirmó la importancia de galactofuranosa y de IPC para caracterizar cepas, estadíos y/o estructuras celulares de Trypanosoma cruzi. La inhibición de IPC sintasa, implicada en la diferenciación de T. cruzi y ausente en mamíferos, es un buen target para la quimioterapia.
This thesis contributes to the knowledge of the structure and biosynthesis of Trypanosoma cruzi molecules which are absent in mammals. The structures studied are: 1. Mucins, membrane glycoconjugates which may contain galactofuranose (Galf), according to the infectivity of the strain. 2. Inositol phospholipids, in particular inositolphosphoceramide (IPC) and its turnover on differentiation of trypomastigotes to amastigotes. The work was divided in two parts: Part A. Procedures were developed for analysis of the oligosaccharides O-linked in mucins of T. cruzi. High pH anion exchange chromatography with pulse amperometric detection (HPAEC-PAD) was used for the separation of galactofuranose-containing oligosaccharides from the isomeric pyranose compounds. This method was used to establish that mucins of a CL clon of T. cruzi contained O-linked N-acetylglucosamine and β−Galp1-4 GlcNAc. Also, the recombinant mucin obtained in transfected epimastigotes (CL Brener) from a gene with tandem repeats in the central region contained β−Galp1-4GlcNAc and β−Galp1-4(β−Galp1-6)GlcNAc. The fact that no galactofuranose was found in mucins of CL strain is in agreement with its classification in the T.cruzi II group of more infective strains. Part B. The previously cloned phosphatidylinositol phospholipase C (TcPI-PLC) was found to be active on IPC and glycoinositol phospholipids (GIPLs), releasing ceramide. The association of phospholipases A1, A2, C, IPC-fatty acid hydrolase and acyl transferase with membranes of the infective forms, amastigotes and trypomastigotes, was ascertained. These enzymes are acting in remodeling reactions leading to the lipid anchor of mature glycoproteins and GIPLs. Aureobasidin A inhibited synthesis of IPC and GIPLs. The antibiotic impaired differentiation of trypomastigotes to amastigotes. Phospholipids in acidocalcisomes from T. cruzi epimastigotes have been characterized by electrospray ionization/mass spectrometry (ESI/MS). They were similar to microsomal phospholipids, although IPC was not detected. The GIPLs of acidocalcisomes, differently than those from membranes do not react with an anti- Galf antibody. Acidocalcisomes are calcium storage organelles found in microorganisms but not in mammalian cells. In conclusion, it was confirmed the importance of galactofuranose and IPC to characterize strains, stages and/or cellular structures of Trypanosoma cruzi. Inhibition of IPC synthase, implicated in T.cruzi differentiation provides a good target for chemotherapy.
Fil: Salto, María Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.