Glicobiología de Trypanosoma cruzi. Parte A : Caracterización de mucinas, aceptoras potenciales en al reacción de transsialidación. Parte B: Biosíntesis de inositolfosfoceramida y glicolipídos durante la diferenciación del estadío trypomastigote al amastigote - Salto, María Laura (2005)
Esta tesis contribuye al conocimiento de la estructura y biosíntesis de moléculas de Trypanosoma cruzi que están ausentes en mamíferos. Las estructuras estudiadas son: 1. Mucinas, glicoconjugados de membrana que pueden contener galactofuranosa (Galf) de acuerdo con la infectividad de la cepa. 2. Inositolfosfolípidos, en particular inositolfosfoceramida (IPC) y su “turnover” durante la diferenciación de trypomastigotes a amastigotes. El trabajo se dividió en dos partes: Parte A. Se desarrollaron procedimientos para el análisis de los oligosacáridos unidos O-glicosídicamente en mucinas de T. cruzi. Para la separación de los oligosacáridos conteniendo galactofuranosa de los de galactopiranosa se utilizó cromatografía de intercambio aniónico con detección por pulso amperométrico (HPAEC-PAD). Este método se usó para analizar las mucinas del clon CL14 de T. cruzi. En las mismas se encontró N-acetilglucosamina y β-Galp1-4GlcNAc. También se encontró, en mucinas recombinantes de epimastigotes de la cepa CL Brener, obtenidas por transfección de un gen con repeticiones en “tandem” en la región central, β-Galp1-4GlcNAc y β-Galp1-4(β-Galp1-6)GlcNAc. La ausencia de galactofuranosa en mucinas de la cepa CL está de acuerdo con su clasificación en el grupo 2 de cepas más infectivas. Parte B. Se demostró que la fosfatidilinositol fosfolipasa C (TcPI-PLC), clonada con anterioridad, fue activa sobre IPC liberando ceramida. Asimismo se demostró la asociación de fosfolipasas A1, A2, C, IPC-hidrolasa y acil transferasa con membranas de las formas infectivas, amastigotes y trypomastigotes. Estas enzimas serían responsables de reacciones de remodelamiento que tienen lugar sobre lípidos de anclas de glicoproteínas maduras y de GIPLs. La síntesis de IPC y de GIPLs fue inhibida con Aureobasidin A. El antibiótico inhibió la diferenciación de trypomastigotes a amastigotes. Los fosfolípidos de los acidocalcisomas de epimastigotes de T. cruzi se caracterizaron por espectrometría de masa con ionización por electrospray (ESI/MS). Fueron similares a los fosfolípidos de microsomas, aunque IPC no fue detectada. Los GIPLs de acidocalcisomas, no reaccionaron con un anticuerpo contra Galf. Los acidocalcisomas son almacenamientos de calcio encontrados en microorganismos y recientemente en células de mamíferos. En conclusión, en esta tesis se confirmó la importancia de galactofuranosa y de IPC para caracterizar cepas, estadíos y/o estructuras celulares de Trypanosoma cruzi. La inhibición de IPC sintasa, implicada en la diferenciación de T. cruzi y ausente en mamíferos, es un buen target para la quimioterapia.