Identificación y caracterización molecular y funcional de variantes de la Proteína Latente de Membrana 1 del virus de Epstein Barr

• Autores: Gantuz, Magdalena
• Año de publicación: 2016
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Preciado, María Victoria; Chabay, Paola Andrea
• Materia: EPSTEIN BARR VIRUS; PROTEINA LATENTE DE MEMBRANA 1; MONONUCLEOSIS INFECCIOSA; LINFOMAS; VARIANTES VIRALES; EVOLUCION; EPSTEIN BARR VIRUS; LATENT MEMBRANE PROTEIN 1; INFECTIOUS MONONUCLEOSIS; LYMPHOMA; VIRAL VARIANTS; EVOLUTION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El Virus de Epstein Barr (EBV), agente etiológico de la mononucleosis infecciosa (MNI), se asocia también a neoplasias. Si bien las causas por las cuales contribuye a lalinfomagénesis están aún en estudio, la identificación de variantes virales asociadas atumores podrían responder en parte este interrogante. Dado que LMP1 es la principal proteína oncogénica de EBV, el objetivo fue identificar y caracterizar las variantesmoleculares en sus regiones promotora y codificante, y determinar su participación en lapatogenia de las enfermedades asociadas. Se incluyeron 29 pacientes pediátricos conlinfomas asociados a EBV, 30 con MNI y 14 controles con hiperplasia reactiva. Se amplificaron mediante PCR las regiones promotora ED-L1 y codificante, se secuenciaron yse realizó análisis filogenético. Se analizó además in vitro la actividad del promotor. Región ED-L1: se definieron 4 clados denominados según las líneas celulares B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 fue el más frecuente (47%), pero no se asoció a a ninguna patología enparticular. Se observaron mutaciones en sitios de unión a factores de transcripción, lapérdida del C/EBP disminuye 3 veces la actividad de ED-L1. Región codificante: se identificaron 6 clados (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentina [Arg]) de loscuales prevaleció la variante de circulación local, Arg, (46%) potencialmente originada por recombinación Raji/China1 y que podría tener un origen africano. No se observó una asociación entre variantes específicas y linfomagénesis, aunque algunos polimorfismostuvieron mayor frecuencia en linfomas. Se estimó una tasa de evolución acelerada encomparación a lo esperado para un herpesvirus, quizás influenciado por la presión deselección positiva sobre codones específicos. Este análisis muestra una evolución complejade este gen y revela la importancia de su potencial utilización como marcador de variantesvirales geográficas.
Epstein Barr virus (EBV), the etiological agent of infectious mononucleosis, is alsoassociated with neoplasia. Little is known about variants prevalence and their influence in EBV diseases. Our aim was to study viral LMP1 variant distribution among children with EBV+ malignant and benign conditions as well as healthy carriers. Oral secretions (OS)and blood cells (PBMC) from 30 children with IM, and biopsies from 14 EBV+ reactivehyperplasia (RH) and 29 EBV+ lymphomas (L) were included. LMP1 sequences wereamplified by nested PCR. Sequencing and phylogenetic analysis was performed. Promoteractivity was assayed in EDL1 variants. ED-L1: Phylogenetic reconstruction defined 4clades termed after B95.8, Cao, Raji and P3HR1. B95.8 clade was the most frequent (47%),but it was not associated with any particular condition. Mutations were found intranscription factor binding sites; the abolition of C/EBP caused a 3-fold diminish in EDL1 activity. Coding region: 6 clades were defined (China1, China2, Med-, Alaskan, B95.8 and Argentine (Arg)). Arg clade, the most prevalent (46%), proved to be a Raji and China1 recombinant. No pathology or compartment associations were observed for LMP1variants, however some polymorphisms presented a higher prevalence in lymphomapatients. Viral evolutionary rate estimated from LMP1 was faster than the expected for aherpesvirus, perhaps due to positive selection influence. These results contribute to theknowledge of EBV genetic diversity and evolution. LMP1 appears to have a complexevolution pattern and reveals the importance of its potential use as a marker ofgeographical viral variants.
Fil: Gantuz, Magdalena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.