Analytical performance of a multiplex real-time pcr assay using taqman probes for quantification of trypanosoma cruzi satellite dna in blood samples

• Autores: Duffy, Tomás; Cura, Carolina Inés; Ramirez, Juan C.; Abate, Teresa; Cayo, Nelly M.; Parrado, Rudy; Diaz Bello, Zoraida; Velazquez, Elsa; Muñoz-Calderón, Arturo; Juiz, Natalia A.; Basile, Joaquín; Garcia, Lineth; Riarte, Adelina; Nasser, Julio R.; Ocampo, Susana B.; Yadón, Zaida E.; Torrico, Faustino; Alarcón de Noya, Belkisyole; Ribeiro, Isabela; Schijman, Alejandro G.
• Año de publicación: 2013
• Idioma: inglés
• Tipo de recurso: artículo
• Fuente: PLOS Neglected Tropical Diseases, 2013, 7(1), e2000.
• Materia: Enfermedad de Chagas; Reacción en Cadena en Tiempo Real de la Polimerasa; Carga de Parásitos; ADN Satélite; Recién Nacido
• Institución: Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"

Fil: Duffy, Tomas. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Fil: Cura, Carolina Ines. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Fil: Ramirez, Juan C. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Fil: Abate, Teresa. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical, Venezuela
Fil: Cayo, Nelly M. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biología de la Altura; Argentina.
Fil: Parrado, Rudy. Universidad San Simón; Bolivia.
Fil: Díaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela.
Fil: Velazquez, Elsa. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Parasitología Dr. Mario Fatala Chaben; Argentina.
Fil: Muñoz-Calderon, Arturo. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela.
Fil: Juiz, Natalia A. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Fil: Basile, Joaquin. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Fil: García, Lineth. Universidad San Simón; Bolivia.
Fil: Riarte, Adelina. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Parasitología Dr. Mario Fatala Chaben; Argentina.
Fil: Nasser, Julio R. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales. Laboratorio de Química Biológica; Argentina.
Fil: Ocampo, Susana B. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biología de la Altura; Argentina.
Fil: Yadon, Zaida E. PAN-American Health Organization; Estados Unidos.
Fil: Torrico, Faustino. Universidad San Simón; Bolivia.
Fil: Alarcón de Noya, Belkisyolé. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela.
Fil: Ribeiro, Isabela. Drugs and neglected diseases intiative; Suiza.
Fil: Schijman, Alejandro G. Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres". Grupo de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas; Argentina.
Background: The analytical validation of sensitive, accurate and standardized Real-Time PCR methods for Trypanosoma cruzi quantification is crucial to provide a reliable laboratory tool for diagnosis of recent infections as well as for monitoring treatment efficacy. Methods/principal findings: We have standardized and validated a multiplex Real-Time quantitative PCR assay (qPCR) based on TaqMan technology, aiming to quantify T. cruzi satellite DNA as well as an internal amplification control (IAC) in a single-tube reaction. IAC amplification allows rule out false negative PCR results due to inhibitory substances or loss of DNA during sample processing. The assay has a limit of detection (LOD) of 0.70 parasite equivalents/mL and a limit of quantification (LOQ) of 1.53 parasite equivalents/mL starting from non-boiled Guanidine EDTA blood spiked with T. cruzi CL-Brener stock. The method was evaluated with blood samples collected from Chagas disease patients experiencing different clinical stages and epidemiological scenarios: 1- Sixteen Venezuelan patients from an outbreak of oral transmission, 2- Sixty three Bolivian patients suffering chronic Chagas disease, 3- Thirty four Argentinean cases with chronic Chagas disease, 4- Twenty seven newborns to seropositive mothers, 5- A seronegative receptor who got infected after transplantation with a cadaveric kidney explanted from an infected subject. Conclusions/significance: The performing parameters of this assay encourage its application to early assessment of T. cruzi infection in cases in which serological methods are not informative, such as recent infections by oral contamination or congenital transmission or after transplantation with organs from seropositive donors, as well as for monitoring Chagas disease patients under etiological treatment.