Aislamiento y caracterización de vesículas extracelulares a partir de células estromales prostáticas humanas derivadas de pacientes con hiperplasia prostática benigna

Autores
Roldán Gallardo, F. F.; Solla, E. D.; Quintar, A. A.
Año de publicación
2022
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
La Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) es una patología que afecta a hombres de edad avanzada, siendo evidentes los primeros síntomas a partir de los 50 años de edad. La HPB se produce como resultado de la proliferación celular descontrolada de la zona de transición prostática que comprime la uretra, provocando la sintomatología propia de la enfermedad. Nuevas evidencias sostienen que contextos aterogénicos, propios de individuos con sobrepeso e hipercolesterolemia, podrían contribuir al inicio y progresión de la HPB, aumentando su incidencia y agresividad. A su vez, el estado hiperproliferativo de la HPB requiere una coordinada comunicación entre las diferentes células que mantienen un microambiente permisivo. En este sentido, las vesículas extracelulares (EVs) han tomado gran relevancia como reguladores de la comunicación intercelular, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas de diversos procesos. Por otra parte, se ha descrito que la molécula de LDL-oxidada (OxLDL) podría verse involucrada en diversas vías de señalización; incluida la señalización por EVs promoviendo la proliferación celular. Las EVs pueden contener gran variedad de biomoléculas que le confieren funciones en la comunicación intercelular y, además, se han reportado efectos proliferativos e inflamatorios mediados por EVs derivadas de distintos tipos celulares tales como leucocitos, macrófagos, células musculares, fibroblastos, entre otras. Es así que nos propusimos como objetivos: 1) evaluar el efecto de OxLDL, simulando un estado aterogénico, sobre la proliferación celular en cultivos primarios de células estromales prostáticas humanas (HPSC), derivadas de muestras de pacientes del Sanatorio Allende de la ciudad de Córdoba; 2) aislar EVs de los cultivos primarios mediante ultracentrifugaciones diferenciales y analizar la producción y liberación al medio de EVs en tratamientos con OxLDL vs. vehículo; 3) caracterizar morfológicamente EVs mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) y confirmar la identidad y presencia de exosomas, a través de inmuno-marcación de CD63 utilizando oro coloidal. Se observó que OxLDL produjo un aumento significativo en la tasa de proliferación celular respecto al vehículo. La obtención de EVs fue posible mediante utracentrifugaciones diferenciales sucesivas y se obtuvieron pellets 2k, 10k y 150k. Las EVs fueron visualizadas por TEM utilizando tinción negativa. Las HPSC de pacientes con BPH mostraron una frecuencia muy baja de EVs liberadas al medio, con OxLDL induciendo un aumento de 10 veces, especialmente en la fracción de 15-20nm (p<0,001). A nivel ultraestructural, estas EVs exhibieron una apariencia cóncava compatible con exosomas. Finalmente, la presencia de exosomas fue verificada con el marcador CD63. De este modo, podemos concluir que OxLDL favorecería la proliferación celular y al incremento y liberación de EVs, las cuales podrían participar en la comunicación celular y mantención de un ambiente permisivo propicio para la progresión y aumento de la agresividad de la HPB.
Asociación Argentina de Microscopía
Universidad Nacional de La Plata
Materia
Ciencias Exactas
Vesículas extracelulares
Ultracentrifugación diferencial
Células estromales prostáticas
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/
Repositorio
SEDICI (UNLP)
Institución
Universidad Nacional de La Plata
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