Métodos empleados en la purificación de enzimas

• Autores: Bottero, Daniela; Hozbor, Daniela Flavia; Lodeiro, Aníbal Roberto
• Año de publicación: 2016
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: parte de libro
• Materia: Química; Bioquímica; enzimas; purificación
• Institución: Universidad Nacional de La Plata

Los organismos estan compuestos por una amplia variedad de proteínas que aunque difieren en la secuencia de sus aminoácidos, y en el plegamiento 3-D de la cadena de aminoácidos, comparten una serie de propiedades ya que se componen esencialmente de los mismos aminácidos. Es así que varias proteínas que se encuentran en un mismo organismo pueden compartir algunas propiedades como por ejemplo su tamaño o su carga. En consecuencia cuando se busca purificar alguna proteína se deben realizar una serie de pasos secuenciales (marcha de purificación) en los que se van discriminando diferencias que en muchos casos resultan ser sutilies. El diseño de una estrategia purificación de proteínas es algo así como la búsqueda de una ruta que debe transitarse en tramos eliminando lo innecesario hasta alcanzar el objetivo con solo lo necesario. Diferentes rutas y diferentes tramos de rutas pueden ser exploradas y para continuar, cada tramo andado debe ser analizado adecuadamente de forma de tomar decisiones sobre si retroceder o seguir y en caso de seguir se debe analizar cuál sería el mejor tramo para continuar el camino. La elección de tramos se debe realizar en base a consideraciones sobre cómo evitar pérdidas de lo necesario, favorecer al máximo la eliminación de lo innecesario y también los costos y tiempo. Así en cado paso de purificación se debe evaluar no solo el rendimiento en la purificación de la proteína problema sino también la pureza alcanzada de la misma. Si bien no hay una sola secuencia de técnicas a seguir, en general se recomienda empezar por técnicas de alta capacidad y seguir con las de baja capacidad pero mayor especificidad. La estrategia a emplear deberá diseñarse teniendo en cuenta la cantidad y el grado de pureza que se quiera alcanzar según el uso que se dará a la proteína. Para usos en investigación, la escala es en general reducida y es mas importante la pureza que el rendimiento. Para usos terapéuticos la escala es mayor y la pureza requerida es máxima. Para usos industriales, frecuentemente se requiere gran cantidad, bajo costo y menor pureza. Si el interés está en la proteína y no importa el organismo de donde se la extraerá, conviene buscar una fuente fácil de obtener, que contenga esa proteína en abundancia y de ser posible de bajo costo. Lo óptimo sería producir la proteína por métodos de ADN recombinante. Dependiendo también de la finalidad, la proteína que se quiere purificar deberá ser obtenida en conformaciones nativas o desnaturalizadas. Por ejemplo para evaluar actividad biológica la proteína debe tener una estructura funcional, en cambio para determinar la estructura primaria, la proteína puede estar desnaturalizada. En este capítulo se presenta una descripción que incluye los aspectos más sobresalientes de las técnicas más utilizadas en el aislamiento, purificación y caracterización de enzimas.
Facultad de Ciencias Exactas