Análisis de la participación de los mecanismos de regulación de la expresión génica por microARNs (miRs) en modelos de hepatotoxicidad experimental

• Autores: Lardizábal, María Noelia
• Año de publicación: 2013
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Veggi, Luis María
• Materia: microARNs; Hepatotoxicidad; Regulación Génica
• Institución: Universidad Nacional de Rosario

La hepatotoxicidad, el daño al hígado inducido por xenobióticos, involucra una alteración importante de la expresión génica. Los microARNs (miARNs) son moléculas de ARN pequeñas que regulan negativamente la expresión génica a nivel post‐transcripcional, y están involucrados en numerosos procesos fisiológicos y fisio‐patológicos. La técnica de referencia para determinar los niveles de ARNm y miARNs es la PCR Cuantitativa en Tiempo Real (RT‐ qPCR). Sin embargo, para poder obtener resultados confiables, exactos y precisos mediante esta técnica, es indispensable contar con un método de normalización apropiado que corrija las diferencias introducidas entre las muestras durante su manipulación. En la primera etapa de este trabajo de Tesis se establecieron cuatro modelos experimentales de hepatotoxicidad aguda en ratas, mediante la administración de hepatotóxicos tradicionales: acetaminofeno, tetracloruro de carbono, D‐galactosamina y tioacetamida. Estos modelos se caracterizaron mediante la determinación de actividades enzimáticas de marcadores de daño hepático y mediante examinación histológica. Sobre estos modelos se desarrolló una técnica de determinación de la expresión de ARNm y miARNs por Real Time qPCR (RT‐qPCR), que consistió en la identificación de la combinación de genes óptima para la normalización de los resultados. Esto se llevó a cabo mediante el empleo de diferentes software diseñados específicamente para este fin. El miARN‐122 es un miARN altamente abundante y específico de hígado, donde está involucrado en funciones críticas del hepatocito, y está asociado a ciertas enfermedades hepáticas. En la segunda etapa de esta Tesis se estudió la participación del miARN‐122 y sus mecanismos regulatorios en los modelos de hepatotoxicidad establecidos. Para esto, mediante la técnica RT‐qPCR desarrollada en la primera etapa del trabajo y mediante Western blot, se determinó la expresión del miARN‐122 maduro, de su precursor, sus genes blanco, marcadores de proliferación y diferenciación celular, y aquellos reguladores (globales y específicos) que pudieran alterar la expresión del miARN‐122. Como conclusión, se postula que los niveles del miARN‐122 se encuentran bajo un control transcripcional en procesos de hepatotoxicidad, a través de los factores de transcripción C/EBPα y HNF4α, y se propone que los cambios en la red regulatoria del miARN‐122 se encuentran asociados a la respuesta del hígado frente a la lesión causada por las hepatotoxinas, probablemente a través de procesos de proliferación celular para reparar el tejido dañado.
Fil: Fil: Lardizábal, María Noelia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Fisiología Experimental (IFISE‐CONICET); Argentina.