Measurement of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activity using fluorescence spectrophotometry

Autores
Valdivieso, Ángel Gabriel; Marín, María C.; Clauzure, Mariángeles; Santa Coloma, Tomás Antonio
Año de publicación
2011
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
Fil: Valdivieso, Ángel Gabriel. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina
Fil: Valdivieso, Ángel Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas; Argentina
Fil: Marín, María C. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina
Fil: Marín, María C. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas; Argentina
Fil: Clauzure, Mariángeles. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina
Fil: Clauzure, Mariángeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentina
Fil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Abstract: Cystic fibrosis (CF) is a frequent autosomal recessive disease caused by mutations that impair the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) protein function. CFTR is a chloride channel activated by cyclic AMP (cAMP) via protein kinase A (PKA) and ATP hydrolysis. We describe here a method to measure CFTR activity in a monolayer of cultured cells using a fluorescence spectrophotometer and the chloridesensitive probe 6-methoxy-N-(3-sulfopropyl)quinolinium (SPQ). Modifying a slice holder, the spectrophotometer quartz cuvette was converted in a perfusion chamber, allowing measurement of CFTR activity in real time, in a monolayer of T84 colon carcinoma cells. The SPQ Stern–Volmer constant (KCl ) for chloride in water solution was 115.0 ± 2.8 M1 , whereas the intracellular KCl was 17.8 ± 0.8 M1 , for T84 cells. A functional analysis was performed by measuring CFTR activity in T84 cells. The CFTR transport inhibitors CFTR(inh)-172 (5 lM) and glibenclamide (100 lM) showed a significant reduction (P < 0.05) in CFTR activity. This simple method allows measuring CFTR activity in a very simple, reproducible, and sensitive way.
Fuente
Analytical Biochemistry Bioquímica Analítica Vol. 418, No. 2, 2011
Materia
FIBROSIS QUÍSTICA
CANAL DE CLORURO
ESPECTROFOTOMETRÍA
REGULADOR DE CONDUCTANCIA TRANSMEMBRANA DE LA FIBROSIS QUÍSTICA
FLUORESCENCIA
Nivel de accesibilidad
acceso embargado
Condiciones de uso
Repositorio
Repositorio Institucional (UCA)
Institución
Pontificia Universidad Católica Argentina
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Abstract: Cystic fibrosis (CF) is a frequent autosomal recessive disease caused by mutations that impair the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) protein function. CFTR is a chloride channel activated by cyclic AMP (cAMP) via protein kinase A (PKA) and ATP hydrolysis. We describe here a method to measure CFTR activity in a monolayer of cultured cells using a fluorescence spectrophotometer and the chloridesensitive probe 6-methoxy-N-(3-sulfopropyl)quinolinium (SPQ). Modifying a slice holder, the spectrophotometer quartz cuvette was converted in a perfusion chamber, allowing measurement of CFTR activity in real time, in a monolayer of T84 colon carcinoma cells. The SPQ Stern–Volmer constant (KCl ) for chloride in water solution was 115.0 ± 2.8 M1 , whereas the intracellular KCl was 17.8 ± 0.8 M1 , for T84 cells. A functional analysis was performed by measuring CFTR activity in T84 cells. The CFTR transport inhibitors CFTR(inh)-172 (5 lM) and glibenclamide (100 lM) showed a significant reduction (P < 0.05) in CFTR activity. This simple method allows measuring CFTR activity in a very simple, reproducible, and sensitive way.
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