Comportamiento electroquímico de nitrato reductasa : aplicaciones analíticas

• Autores: Ferreyra, Nancy Fabiana
• Año de publicación: 2002
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Solis, Velia Matilde; Gerez de Burgos, Nelia Martha; Maggio, Bruno; Lacconi
• Materia: Biosensores; Nitrato reductasa; Electroquímica
• Institución: Universidad Nacional de Córdoba

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2002.
Fil: Ferreyra, Nancy Fabiana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Fisicoquímica; Argentina.
Fil: Ferreyra, Nancy Fabiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Fisicoquímica de Córdoba; Argentina.
La cuantificación del ion nitrato es de interés en múltiples áreas de investigación. Este anión es un contaminante muy frecuente de suelo y agua, debido principalmente a su uso como fertilizante. La consecuencia más grave de la exposición a altas concentraciones de nitrato es la Metahemoglobinemia, causada por la oxidación del hierro contenido en la hemoglobina [Campbell W., 20011. Por otra parte, diversos estudios sobre cáncer han incluido como factor de riesgo la exposición, por tiempo prolongado, a dietas con alta concentración de nitrato. Por estos motivos, la mayoría de los países han adoptado un límite de contaminación máxima permitido para agua potable, por ejemplo en Estados Unidos este valor es de 10 ppm de Nitrógeno como nitrato [Kay C. J. et al., 19881. Por lo tanto, se hace necesaria la regulación y el monitoreo de los contenidos de nitrato en muestras de interés ambiental y biológico a través de métodos analíticos que permitan su adecuada cuantificación. Si bien existen varios métodos para la determinación de nitrato, la mayoría de ellos están sujetos a la interferencia de otros componentes de las muestras. Algunos de los métodos tomados como referencia se basan en la reducción de nitrato a nitrito empleando metales reductores como el zinc y el cadmio y la posterior determinación del nitrito formado por reacción colorimétrica [Sah R. N.,1994]. El empleo de biosensores con la enzima Nitrato Reductasa (NR) como elemento de reconocimiento permitiría la cuantificación de nitrato evitando el uso de metales altamente tóxicos y ofreciendo una alternativa que no requiere equipamientos costosos y pretratamientos de las muestras. La Nitrato Reductasa (NR) es una enzima ampliamente distribuida en los sistemas biológicos y cataliza la reducción de nitrato a nitrito. Tiene un peso molar de 200 kD y está formada por dos monómeros, cada uno de los cuales posee tres sitios activos con propiedades catalíticas particulares: el Flavina Adenina Dinucleótido (FAD), donde se une la molécula de NAD(P)H, que es el regenerador natural de la enzima; el molibdeno, donde se reduce el nitrato y conectando a ambos sitios, un grupo Hemo cuya función es la transferencia electrónica desde el FAD al sitio de reducción del ion nitrato [Cannons A. C. et al.,1991;1993; Hyde G. E. et al., 19911. El sitio molibdeno puede ser regenerado en su forma activa a través de moléculas rédox con potenciales de reducción adecuados, denominadas mediadores [Ferreyra N. F. y Solis V. M., 20001. La NR ha sido muy estudiada para dilucidar aspectos referentes a su estructura, funcionamiento y a la cinética de los procesos en los que interviene. Sin embargo, a pesar de la importancia de la reacción química catalizada por esta enzima, pocos han sido los estudios tendientes al desarrollo de biosensores donde se la emplea como elemento de reconocimiento.
Fil: Ferreyra, Nancy Fabiana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Fisicoquímica; Argentina.
Fil: Ferreyra, Nancy Fabiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Fisicoquímica de Córdoba; Argentina.