Identificación y caracterización de genes implicados en el metabolismo de esteroles en Tetrahymena mediante análisis bioinformático, expresión heteróloga y análisis transcriptómico...

• Autores: Poklépovich Caride, Tomás Javier
• Año de publicación: 2015
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Nusblat, Alejandro David; Nudel, Berta Clara; Agüero, Fernán; Gutkind, Gabriel; Taboga, Oscar
• Materia: Esteroles; Tetrahymena; Análisis bioinformático; Análisis transcriptómico; Ciencia de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

The ciliate Tetrahymena thermophila does not synthesize nor require sterols for growth, although synthesizes tetrahymanol, unlike other ciliates which do not produce tetrahymanol and are auxotrophic for sterols. Some ciliates can incorporate sterols and modify them. Tetrahymanol and sterol metabolic pathways were analyzed in silico, revealing the presence of the complete tetrahymanol synthesis pathway in Tetrahymena, with enzymes from diverse origins, but incomplete in other ciliates analyzed. Moreover, the gene expression level in response to sterol was investigated in T. thermophila showing the regulation of the metabolic pathway of tetrahymanol and sterols. T. thermophila transforms some sterols through four enzymatic activities, C-5, C-7 and C-22 desaturations and C-24 de-ethylation. C-5 sterol desaturase (Des5Ap) is a cytochrome b5 / cytochrome b5 reductase dependent, while the C-7 sterol desaturase (Des7p) electron donor system is unknown. Functionality and conservation of electron donors of both were analyzed by expressing Des5Ap in Saccharomyces cerevisiae and Des7p in Spodoptera frugiperda cells, revealing that both enzymes are functional despite the evolutionary distance, and also the electron donor are preserved systems.
Fil: Poklépovich Caride, Tomás Javier. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
El ciliado Tetrahymena thermophila no sintetiza ni requiere esteroles para su crecimiento, aunque sintetiza tetrahymanol, a diferencia de otros ciliados que no lo hacen y son auxótrofos para esteroles. Algunos ciliados pueden incorporar esteroles y modificarlos. Se analizaron, a nivel bioinformático, las vías metabólicas de tetrahymanol y esteroles, revelando la presencia de la vía completa de síntesis de tetrahymanol en Tetrahymena, con enzimas provenientes de diferentes orígenes, pero incompleta en los otros ciliados analizados. Además, se investigó la respuesta, a nivel de la expresión génica, de T. thermophila a esteroles, mostrando una regulación de la vía metabólica de tetrahymanol y de esteroles. T. thermophila transforma a algunos esteroles a través de 4 actividades enzimáticas, C-5, C-7 y C-22 desaturaciones y C-24 des-etilación. C-5 esterol desaturasa (Des5Ap) es dependiente del sistema citocromo b5/ citocromo b5 reductasa, mientras que se desconoce el sistema dador de electrones de C-7 esterol desaturasa (Des7p). Se analizaron la funcionalidad y la conservación de los sistemas dadores de electrones de ambas, expresando Des5Ap en Saccharomyces cerevisiae y Des7p en células de Spodoptera frugiperda, revelando que ambas enzimas son funcionales a pesar de la distancia evolutiva y además que los sistemas dadores de electrones son conservados.
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Biotecnología