Expresión de antígenos de Babesia bovis y Cryptosporidium parvum en el ciliado Tetrahymena thermophila para el desarrollo de vacunas a subunidades

• Autores: Montes, María Guadalupe
• Año de publicación: 2022
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Nusblat, Alejandro D.; Schnittger, Leonhard; Valdez, Silvina; Nadra, Alejandro; Uttaro, Antonio
• Materia: Tetrahymena; Proteínas GPI; Vacunas; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Tetrahymena thermophila is a free-living protozoon that has been used as a biotechnological platform for the expression of several recombinant antigens. In the present study, its ability to express vaccine candidates of Babesia bovis and Cryptosporidium parvum was evaluated. Both parasites are pathogenic apicomplexan protozoans responsible for a considerable morbidity and mortality of bovines. The glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored antigens (GPI4) of B. bovis and GP60 of C. parvum were expressed in clones of T. thermophila, after transformation with corresponding recombinant episomal vectors. GPI functions as protein anchor and is a potent modulator of the host immune response. The ciliate was able to express GPI4 and GP60 in the parasite membrane. The optimized culture conditions for the expression of the recombinant antigens were determined at 5 ?g/mL Cl2Cd, a volume of 15 mL and a time of induction between 6 to 8 h. Based on these conditions, a culture of 1L in a bioreactor was successfully achieved. Finally, recombinant GP60 expressed by T. thermophila clones was recognized by sera from calves naturally infected with C. parvum demonstrating its immunoreactivity and the principal aptitude of the ciliate for recombinant expression of vaccine candidates.
Fil: Montes, María Guadalupe. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
El ciliado Tetrahymena thermophila ha surgido como una plataforma de expresión por sus cualidades biotecnológicas. Se estudió si es posible expresar en él candidatos vacunales de Babesia bovis y Cryptosporidium parvum, protozoos patógenos del filo Apicomplexa que afectan al ganado bovino causando importantes pérdidas económicas. Se evaluó la transformación de T. thermophila integrativa y episomal, y se seleccionó esta última por su eficiencia para la expresión de GPI4 de B. bovis y GP60 de C. parvum, ambos con señal de anclaje a glicosilfosfatidilinositol (GPI). El GPI funciona como ancla de proteínas en la membrana y es un importante modulador de la respuesta inmunológica. T. thermophila fue capaz de reconocer las señales de direccionamiento de GPI4 y GP60, y de expresarlos en membranas como antígenos recombinantes. Las condiciones óptimas de cultivo para su expresión se hallaron con 5 ?g/mL Cl2Cd, en un volumen de 15 ml y a las 6 a 8 h de inducción, y se logró el escalado del cultivo a un biorreactor de 1L. Finalmente, epitopes B en GP60 recombinante fueron reconocidos por anticuerpos presentes en sueros de bovinos infectados con C. parvum, demostrando que T. thermophila es apto para expresar este antígeno como candidato vacunal.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Bioquímicas