Estudio in vitro e in vivo de una cepa recombinante de Herpesvirus bovino 1 (BoHV-1deltagEbetagal)

• Autores: Kotsias, Fiorella
• Año de publicación: 2010
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Romera, Sonia Alejandra
• Materia: Herpesvirus bovino1; Infección viral aguda; Latencia y reactivación; Vacunas marcadoras; Glicoproteína E; Constitución genómica; Bovinos; Herpesvirus tipò 1; Cepa viral recombinante; In vivo; In vitro; Microbiología
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Bovine herpesvirus 1 is an alfaherpesvirus that infects cattle producing respiratory, genital and reproductive disease. It is a neurotropic virus that establishes latency in sensory ganglia, and\nviral reexcretion after reactivation of latent infections is responsible for the perpetuation of the\nagent in the field. In our country, seroprevalence can reach 80% and vaccination is the strategy used to control this disease. A recombinant virus was developed in our laboratory to be used as a marker vaccine, from BoHV-1.1 strain Los Angeles (LA) through allelic replacement of the gene encoding glycoprotein E by the lac z gene, named BoHV-1?gE?gal. Genomic characterization of BoHV-1?gE?gal strain verified the absence of changes in the\ngE gene flanking regions, and specifically identified the sites where allelic exchange occurred. The RFLP study showed that this strain has a different pattern than expected, indicating changes in certain restriction sites. The study of the in vitro behavior established that this strain is less\nefficient in producing infectious viral particles as well as in viral dispersion when compared to the\nparental or other gE gene deleted strains, both in the mechanism of cell-to-cell spread and in the\nrelease of infectious viral particles into the extracellular medium. BoHV-1?gE?gal virus is\nattenuated in the natural host, and this attenuation is greater than that described for other gE gene deleted strains, albeit immunogenic, it is not excreted nor produces clinical disease after intranasal infection, and does not establish a latent infection or is reactivated experimentally. The experience of BoHV-1 viral infection and the methodology developed in this work applied to the analysis of samples from infected animals are a valuable tool for studying the\npathogenesis of genetically modified viruses, recombinant virus and field isolates. On the other\nhand, it is a contribution to the knowledge of parental BoHV-1 LA strain which is used in viral\nchallenge experiences. The results of this thesis work, taken together with the history of immunogenicity, protection against viral challenge and safety of BoHV-1?gE?gal strain and the increasing global trend towards the use of live marker vaccines in controlling diseases caused by BoHV-1, indicate that BoHV-1?gE?gal strain could be incorporated as a live immunogen in vaccination schemes of future BoHV-1 control and eradication plans in our country without risk of\ncausing illness, latency or virus spread to other animals, therefore reducing the incidence of bovine respiratory disease.\n
Fil: Kotsias, Fiorella. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Buenos Aires, Argentina
Fil: Kotsias, Fiorella. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología. Castelar, Argentina
El herpesvirus bovino 1 es un alfaherpesvirus que infecta al ganado bovino produciendo cuadros clínicos respiratorios, genitales y/o reproductivos. Es un virus neurotrópico que establece latencia en ganglios sensoriales, y la reexcreción viral luego de la reactivación de la infección\nlatente es responsable de la perpetuación del agente en los rodeos. En nuestro país la seroprevalencia puede alcanzar el 80% y la vacunación es la estrategia utilizada para el control de\nla enfermedad. En nuestro laboratorio se desarrolló, a partir de la cepa BoHV-1.1 Los Angeles (LA), un virus recombinante mediante el reemplazo alélico del gen que codifica para la\nglicoproteina E por el gen lac z, denominada BoHV-1?gE?gal, para su utilización como vacuna\nmarcadora. La caracterización genómica de la cepa BoHV-1?gE?gal verificó la ausencia de cambios en las regiones flanqueantes al gen gE y permitió identificar específicamente los sitios donde ocurrió\nel intercambio alélico. El estudio de RFLP mostró que esta cepa posee un patrón diferente al esperado, indicando modificaciones en ciertos sitios de restricción. El estudio del comportamiento\nin vitro mostró que esta cepa es menos eficiente en la producción de partículas virales infectivas\nasí como en la dispersión viral respecto a la cepa parental BoHV-1 LA y a otras cepas gE-, tanto en\nel mecanismo de pasaje célula a célula como en el de liberación de partículas virales infectivas al\nmedio extracelular. El virus BoHV-1?gE?gal se encuentra atenuado en su virulencia en el\nhospedador natural, y esta atenuación es mayor que la descripta para otras cepas gE-, ya que si bien induce una respuesta inmune humoral sérica y de mucosas, no se excreta ni produce enfermedad clínica luego de la infección intranasal, así como tampoco establece una infección latente ni se reactiva experimentalmente.\nLa experiencia de infección viral con BoHV-1 y la metodología desarrollada en este trabajo aplicada al análisis de muestras provenientes de animales infectados constituyen una valiosa herramienta para el estudio de la patogenia de virus genéticamente modificados, virus\nrecombinantes y aislamientos de campo. Por otro lado, resulta una contribución al conocimiento de la cepa parental BoHV-1 LA que se utiliza en las experiencias de desafío viral. Los resultados de\neste trabajo de Tesis, conjuntamente con los antecedentes de inmunogenicidad, protección frente al desafío viral e inocuidad de la cepa BoHV-1?gE?gal, sumado a la creciente tendencia mundial en el uso de vacunas marcadoras vivas en el control de la enfermedad causada por BoHV-1, indican que la cepa BoHV-1?gE?gal podría incorporarse como inmunógeno vivo en los esquemas de\nvacunación de futuros planes de control y erradicación de BoHV-1 en nuestro país sin riesgos de\nproducir enfermedad, latencia o diseminarse a otros animales, reduciendo la incidencia de\nenfermedad respiratoria bovina.
Microbiología
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Veterinarias