Estratificación pronóstica de pacientes con Leucemia Mieloide Crónica mediante la cuantificación por PCR real time de los niveles de transcripto de BCR-ABL1

• Autores: Zaffanella, María Belén
• Año de publicación: 2019
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Bianchini, Michele; Slavutski, Irma; Dain, Liliana; Giliberto, Florencia
• Materia: Leucemia mieloide crónica; PCR; Niveles de transcripto; BCR-ABL1; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

The treatment of chronic myeloid leukemia (CML) has changed radically in recent decades thanks to the introduction of tyrosine kinase inhibitors (ITK). Imatinib was the first inhibitor used and then the second and third generation were incorporated (eg Nilotinib, Dasatinib and Ponatinib).\nThanks to these molecularly targeted therapies, the majority of patients with CML, treated in the chronic phase of the disease, reach the complete cytogenetic response (CCR) after one year of treatment. However, even with CCR, the bone marrow can still contain a significant number of leukemic cells. For this reason it was necessary to implement quantitative real-time PCR (qRT-PCR) that allows to measure, with a higher sensitivity, the levels of BCR-ABL1 chimeric transcript in peripheral blood.\nFor the measurement of transcripts of BCR-ABL1, the International Scale represents a practical method to be able to compare the results of the qRT-PCR obtained in different laboratories; for this purpose, it is necessary for each laboratory to calculate a specific conversion factor (FC), using reference standards. From these calibrators, we obtained our FC to express the harmonized results at the international scale. Then, through the harmonized methodology, 191 peripheral blood samples anticoagulated with EDTA from 180 patients with a previous diagnosis of CML were studied.\nIn this thesis work, the level of molecular response reached is described according to the type of treatment and time. As a significant result, we found that although there is no significant difference between taking Imatinib or a generic one to achieve a greater molecular response, we saw that there is a tendency for Gleevec to be more effective over generics in achieving a deep molecular response. When we compared first and second generation inhibitors, we saw that Nilotinib has more impact to reach the deep molecular response than the larger molecular response, compared with Imatinib.\nFinally, this work shows the procedure and the complexity of harmonizing a molecular biology laboratory at the international scale for the measurement of BCR-ABL1 levels in peripheral blood, for patients with CML. However, this harmonization is a key step to be able to compare the results between laboratories, and at different times of treatment; In addition to these values corrected by the FC, the results acquire prognostic value, therefore they are useful for the doctor to make accurate clinical decisions, according to the international guidelines.
Fil: Zaffanella, María Belén. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
El tratamiento de la leucemia mieloide crónica (LMC) cambió radicalmente en las últimas décadas gracias a la introducción de los inhibidores de tirosina kinasa (ITK). El Imatinib fue el primer inhibidor utilizado y luego se incorporaron los de segunda y tercera generación, (p. ej. Nilotinib, Dasatinib y Ponatinib).\nGracias a estas terapias molecularmente dirigidas, la mayoría de los pacientes con LMC, tratados en la fase crónica de la enfermedad, alcanza la repuesta citogenética completa (RCC) al cabo de un año de tratamiento. Sin embargo, aún con RCC, la medula ósea puede todavía contener un número significativo de células leucémicas. Por esta razón fue necesario implementar la PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) que permite medir, con una sensibilidad superior, los niveles de transcripto quimérico BCR-ABL1 en sangre periférica.\nPara la medición de transcriptos de BCR-ABL1, la Escala Internacional representa un método práctico para poder comparar los resultados de la qRT-PCR obtenidos en diferentes laboratorios; a tal efecto es necesario que cada laboratorio calcule un factor de conversión (FC) especifico, mediante estándares de referencia. A partir de estos calibradores, logramos obtener nuestro FC para expresar los resultados armonizados a la escala internacional. Luego, mediante la metodología armonizada, se estudiaron 191 muestras de sangre periférica anticoaguladas con EDTA provenientes de 180 pacientes con diagnóstico previo de LMC.\nEn este trabajo de tesis, se describe el nivel de respuesta molecular alcanzada de acuerdo al tipo de tratamiento y al tiempo. Como resultado significativo encontramos que si bien no hay diferencia significativa entre tomar Imatinib o un genérico para alcanzar una respuesta molecular mayor, vimos que hay una tendencia a una mayor eficacia del Gleevec sobre los genéricos para alcanzar una respuesta molecular profunda. Cuando comparamos inhibidores de primera y segunda generación, vimos que el Nilotinib tiene más impacto para alcanzar la respuesta molecular profunda que la respuesta molecular mayor, comparando con Imatinib.\nEn conclusión, este trabajo de tesis, muestra el procedimiento y la complejidad de armonizar un laboratorio de biología molecular a la escala internacional para la medición de los niveles de BCR-ABL1 en sangre periférica, para los pacientes con LMC. Sin embargo, esta armonización es un paso clave para poder comparar los resultados entre laboratorios, y en diferentes momentos del tratamiento; además de acuerdo a estos valores corregidos mediante el FC, los resultados adquieren valor pronóstico, por lo tanto son útiles para que el médico pueda tomar decisiones clínicas acertadas, de acuerdo a las líneas guía internacionales.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica