Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña...

Autores
Batto, María Victoria
Año de publicación
2022
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis de maestría
Estado
versión aceptada
Colaborador/a o director/a de tesis
García, Cybele C.
Helguera, Gustavo
Castilla, Viviana
Scolaro, Luis
Romanowski, Victor
Descripción
Fil: Batto, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Entre los Mammarenavirus del Nuevo Mundo (NWM) del clado B se encuentran los agentes etiológicos causantes de las Fiebres Hemorrágicas Sudamericanas. Estos virus integran una familia de patógenos de prioridad A debido a su alta infectividad y mortalidad, con limitadas opciones terapéuticas. En 2020 se identificó en Brasil un nuevo miembro de la familia, que causó una víctima fatal, y por alta homología con el virus Sabiá ha sido denominado Sabiá-like (SABV-L). En este trabajo nos dispusimos a estudiar y caracterizar este nuevo Mammarenavirus causante de la Fiebre Hemorrágica Brasilera. Dado que los NWM patogénicos utilizan el receptor de transferrina humano 1 (hTfR1) y la vía de las clatrinas para su entrada a la celula, nos dispusimos a determinar el papel de este receptor y su vía en la entrada celular de SABV-L.\nPara estos estudios desarrollamos partículas virales pseudotipadas de SABV-L cotransfectando células HEK293T con un sistema de 3 vectores que expresan: a) la poliproteína estructural gag/pol de MuLV; b) el gen reportero eGFP; y c) las glicoproteínas GP1/GP2 de SABV-L (GenBank: MN956774).\nEstudios de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo permitieron confirmar un rol importante de hTfR1 en la internalización de pseudovirus de SABV-L. Células CHO-hTfR1 que expresan hTfR1 mostraron altos niveles de fluorescencia en presencia de pseudovirus de SABV-L, pero no las células CHO-K1 que no expresan hTfR1. Así mismo, se observó una inhibición significativa de internalización del PV-SABV-L en células HEK293T que expresan hTfR1 en presencia de 450 nM de hTfR1 soluble.\nEnsayos adicionales mostraron una inhibición significativa de la internalización de pseudovirus de SABV-L en presencia de clorpromazina, un inhibidor de la vía de las clatrinas. Además, el anticuerpo monoclonal anti-hTfR1 OKT9, demostró bloquear de forma dosis dependiente la internalización de PV-SABV-L tanto en forma de IgG completa (IC50: 0,63nM) como de Fab-OKT9 (IC50: 10,19nM).\nEstos resultados proporcionan evidencia de un importante rol de hTfR1 y de la vía de las clatrinas en la entrada de SABV-L y sugieren la factibilidad de desarrollar un agente terapéutico a partir de OKT9.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biotecnología
Materia
Arenavirus
SABV-Like
Anticuerpo monoclonal
OKT9
Fiebres hemorrágicas sudamericanas
Mammarenavirus
Ciencias de la vida
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
Institución
Universidad de Buenos Aires
OAI Identificador
oai:RDI UBA:afamaster:HWA_6746

id RDIUBA_b6bdc09d4c43e5d7f792178b3d6f527d
oai_identifier_str oai:RDI UBA:afamaster:HWA_6746
network_acronym_str RDIUBA
repository_id_str
network_name_str Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
spelling Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileñaBatto, María VictoriaArenavirusSABV-LikeAnticuerpo monoclonalOKT9Fiebres hemorrágicas sudamericanasMammarenavirusCiencias de la vidaFil: Batto, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaEntre los Mammarenavirus del Nuevo Mundo (NWM) del clado B se encuentran los agentes etiológicos causantes de las Fiebres Hemorrágicas Sudamericanas. Estos virus integran una familia de patógenos de prioridad A debido a su alta infectividad y mortalidad, con limitadas opciones terapéuticas. En 2020 se identificó en Brasil un nuevo miembro de la familia, que causó una víctima fatal, y por alta homología con el virus Sabiá ha sido denominado Sabiá-like (SABV-L). En este trabajo nos dispusimos a estudiar y caracterizar este nuevo Mammarenavirus causante de la Fiebre Hemorrágica Brasilera. Dado que los NWM patogénicos utilizan el receptor de transferrina humano 1 (hTfR1) y la vía de las clatrinas para su entrada a la celula, nos dispusimos a determinar el papel de este receptor y su vía en la entrada celular de SABV-L.\nPara estos estudios desarrollamos partículas virales pseudotipadas de SABV-L cotransfectando células HEK293T con un sistema de 3 vectores que expresan: a) la poliproteína estructural gag/pol de MuLV; b) el gen reportero eGFP; y c) las glicoproteínas GP1/GP2 de SABV-L (GenBank: MN956774).\nEstudios de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo permitieron confirmar un rol importante de hTfR1 en la internalización de pseudovirus de SABV-L. Células CHO-hTfR1 que expresan hTfR1 mostraron altos niveles de fluorescencia en presencia de pseudovirus de SABV-L, pero no las células CHO-K1 que no expresan hTfR1. Así mismo, se observó una inhibición significativa de internalización del PV-SABV-L en células HEK293T que expresan hTfR1 en presencia de 450 nM de hTfR1 soluble.\nEnsayos adicionales mostraron una inhibición significativa de la internalización de pseudovirus de SABV-L en presencia de clorpromazina, un inhibidor de la vía de las clatrinas. Además, el anticuerpo monoclonal anti-hTfR1 OKT9, demostró bloquear de forma dosis dependiente la internalización de PV-SABV-L tanto en forma de IgG completa (IC50: 0,63nM) como de Fab-OKT9 (IC50: 10,19nM).\nEstos resultados proporcionan evidencia de un importante rol de hTfR1 y de la vía de las clatrinas en la entrada de SABV-L y sugieren la factibilidad de desarrollar un agente terapéutico a partir de OKT9.Magíster de la Universidad de Buenos Aires en BiotecnologíaUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y BioquímicaGarcía, Cybele C.Helguera, GustavoCastilla, VivianaScolaro, LuisRomanowski, Victor2022-03-21info:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_bdccinfo:ar-repo/semantics/tesisDeMaestriaapplication/pdfhttp://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_6746https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_6746.dir/6746.PDFspainfo:eu-repo/semantics/openAccesshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/reponame:Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Airesinstname:Universidad de Buenos Aires2025-09-29T15:13:07Zoai:RDI UBA:afamaster:HWA_6746instacron:UBAInstitucionalhttp://repositoriouba.sisbi.uba.ar/Universidad públicahttps://www.uba.ar/http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/oaiserver.cgicferrando@sisbi.uba.arArgentinaopendoar:2025-09-29 15:13:07.641Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires - Universidad de Buenos Airesfalse
dc.title.none.fl_str_mv Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
title Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
spellingShingle Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
Batto, María Victoria
Arenavirus
SABV-Like
Anticuerpo monoclonal
OKT9
Fiebres hemorrágicas sudamericanas
Mammarenavirus
Ciencias de la vida
title_short Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
title_full Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
title_fullStr Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
title_full_unstemmed Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
title_sort Desarrollo de un sistema de pseudovirus para el estudio in vitro del nuevo M ammarenavirus patogénico S abi á like? ( SABV L ), nuevo causante de la fiebre hemorrágica brasileña
dc.creator.none.fl_str_mv Batto, María Victoria
author Batto, María Victoria
author_facet Batto, María Victoria
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv García, Cybele C.
Helguera, Gustavo
Castilla, Viviana
Scolaro, Luis
Romanowski, Victor
dc.subject.none.fl_str_mv Arenavirus
SABV-Like
Anticuerpo monoclonal
OKT9
Fiebres hemorrágicas sudamericanas
Mammarenavirus
Ciencias de la vida
topic Arenavirus
SABV-Like
Anticuerpo monoclonal
OKT9
Fiebres hemorrágicas sudamericanas
Mammarenavirus
Ciencias de la vida
dc.description.none.fl_txt_mv Fil: Batto, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Entre los Mammarenavirus del Nuevo Mundo (NWM) del clado B se encuentran los agentes etiológicos causantes de las Fiebres Hemorrágicas Sudamericanas. Estos virus integran una familia de patógenos de prioridad A debido a su alta infectividad y mortalidad, con limitadas opciones terapéuticas. En 2020 se identificó en Brasil un nuevo miembro de la familia, que causó una víctima fatal, y por alta homología con el virus Sabiá ha sido denominado Sabiá-like (SABV-L). En este trabajo nos dispusimos a estudiar y caracterizar este nuevo Mammarenavirus causante de la Fiebre Hemorrágica Brasilera. Dado que los NWM patogénicos utilizan el receptor de transferrina humano 1 (hTfR1) y la vía de las clatrinas para su entrada a la celula, nos dispusimos a determinar el papel de este receptor y su vía en la entrada celular de SABV-L.\nPara estos estudios desarrollamos partículas virales pseudotipadas de SABV-L cotransfectando células HEK293T con un sistema de 3 vectores que expresan: a) la poliproteína estructural gag/pol de MuLV; b) el gen reportero eGFP; y c) las glicoproteínas GP1/GP2 de SABV-L (GenBank: MN956774).\nEstudios de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo permitieron confirmar un rol importante de hTfR1 en la internalización de pseudovirus de SABV-L. Células CHO-hTfR1 que expresan hTfR1 mostraron altos niveles de fluorescencia en presencia de pseudovirus de SABV-L, pero no las células CHO-K1 que no expresan hTfR1. Así mismo, se observó una inhibición significativa de internalización del PV-SABV-L en células HEK293T que expresan hTfR1 en presencia de 450 nM de hTfR1 soluble.\nEnsayos adicionales mostraron una inhibición significativa de la internalización de pseudovirus de SABV-L en presencia de clorpromazina, un inhibidor de la vía de las clatrinas. Además, el anticuerpo monoclonal anti-hTfR1 OKT9, demostró bloquear de forma dosis dependiente la internalización de PV-SABV-L tanto en forma de IgG completa (IC50: 0,63nM) como de Fab-OKT9 (IC50: 10,19nM).\nEstos resultados proporcionan evidencia de un importante rol de hTfR1 y de la vía de las clatrinas en la entrada de SABV-L y sugieren la factibilidad de desarrollar un agente terapéutico a partir de OKT9.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biotecnología
description Fil: Batto, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
publishDate 2022
dc.date.none.fl_str_mv 2022-03-21
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
http://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc
info:ar-repo/semantics/tesisDeMaestria
format masterThesis
status_str acceptedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_6746
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_6746.dir/6746.PDF
url http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_6746
https://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/collect/afamaster/index/assoc/HWA_6746.dir/6746.PDF
dc.language.none.fl_str_mv spa
language spa
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
publisher.none.fl_str_mv Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
instname:Universidad de Buenos Aires
reponame_str Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
collection Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires
instname_str Universidad de Buenos Aires
repository.name.fl_str_mv Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires - Universidad de Buenos Aires
repository.mail.fl_str_mv cferrando@sisbi.uba.ar
_version_ 1844624351750520832
score 12.559606