Correlación ente mutaciones en el exón 15 del oncogén BRAF con distintas características histopatológicas y la evolución clínica de pacientes con melanoma cutáneo en diferentes est...

• Autores: Yepes Crow, Michelle Elizabeth
• Año de publicación: 2015
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Aris, Mariana; Mordoh, José; Cotignola, Javier; Rivolta, Carina; Vázquez, Elba
• Materia: Melanoma cutáneo; Variables clínico-patológicas; Oncogén BRAF; Incidencia poblacional; Factor pronóstico; Cutaneous melanoma; Clinico-pathological features; BRAF oncogene; Population incidence; Prognostic factor; Ciencia de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Cutaneous melanoma (CM) is the skin cancer with the higher increase in incidence. CM presents a high mutation rate, the most relevant nucleotide mutation is T1799A, resulting in the amino acid substitution V600E, in the BRAF oncogene. The serine-threonine protein kinase BRAFV600E is a constitutively active variant associated with cell proliferation involving the MAPK pathway. Among CM cell lines established in our laboratory there are BRAFV600E (8/16), BRAFV600K (4/16) and BRAFWT (4/16) variants. BRAFV600E cell lines present greater proliferative and clonogenic index in vitro. Recent studies performed in patients with regional metastases (AJCC stage III) reported a correlation between the presence of mutated BRAFV600 and a worse prognosis. The objective of this research was to determine the prevalence and status of BRAF mutations in tumor biopsies from a population of patients with CM in different stages (II, III, IV), all treated at the Instituto Alexander Fleming (n = 44), and their possible link with other clinico-pathological parameters. To do this, a methodology was established; DNA isolation from tumor biopsies fixed in formalin and embedded in paraffin; followed by the amplification of the region of interest and subsequent sequence analysis by the method of Sanger. Finally, BRAF mutational status of each biopsy was correlated to tumor clinico-pathologic characteristics.\nThe analyzed CM population presented a BRAFV600 oncogene mutation frequency of 77%, higher than that reported in bibliography which varies in the range 17-72%. We observed prevalence of BRAFV600E (98 %) mutation, followed by BRAFV600K (2%). The results obtained in the study population indicate that the mutated BRAF oncogene presents an association with some clinico-pathological parameters related to tumor progression, such as a Breslow thickness >2 mm in primary tumors (p=0,012), the presence of lymph node metastasis (p = 0,0036); and the proliferative index of metastatic tumors (p = 0,0353). No significant associations neither with other clinico-pathological characteristics nor with the clinical evolution were found. These results open the possibility of considering the BRAF oncogene mutational status as a prognostic factor, in order to improve staging of CM patients.
Fil: Yepez Crow, Michelle Elizabeth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
El melanoma cutáneo (MC) es el cáncer de piel con mayor incremento en su incidencia. Presenta alta tasa de mutaciones, siendo la más relevante la mutación nucleotídica T1799A, sustitución aminoacídica (V600E) en el oncogén BRAF. La proteína serina-treonina quinasa BRAFV600E es una variante constitutivamente activa asociada a la proliferación celular por la vía MAPK. Entre las líneas celulares de MC establecidas en nuestro laboratorio hay variantes BRAFV600E (8/16), BRAFV600K (4/16) y BRAFWT (4/16); presentando las líneas BRAFV600E mayor índice proliferativo y clonogénico in vitro. Trabajos recientes en pacientes con metástasis regionales de MC (estadio III AJCC) reportaron una correlación entre la presencia de BRAFV600 mutado y un peor pronóstico. Este trabajo de investigación tiene el objetivo de determinar la prevalencia del status mutacional del oncogén BRAFV600 en biopsias tumorales en una población de pacientes con MC en diferentes estadios clínico (II, III, IV), procedentes del Instituto Alexander Fleming (n=44), y su posible relación con otros parámetros clínico-patológicos. Para ello, se estableció una metodología de trabajo; desde la extracción de ADN tumoral a partir de biopsias fijadas en formol y embebidas en parafina; hasta la amplificación de la región de interés y posterior análisis de su secuencia por el método de Sanger. Luego se determinó el status mutacional de BRAF en cada biopsia, y su relación con las características clínico-patológicas del tumor.\nLa población de pacientes con MC analizada presentó una frecuencia del oncogén BRAFV600 mutado del 77%, mayor a lo reportado en bibliografía que oscila en un rango de 17-72%. De los pacientes con tumores BRAFV600 mutado, se observó una prevalencia de la mutación BRAFV600E (98%), seguida de BRAFV600K (2%). Los resultados obtenidos en la población del estudio, indican que el status mutacional del oncogén BRAF presenta una asociación con parámetros clínico-patológicos relacionados a la progresión tumoral, como el índice de Breslow mayor a 2mm en tumores primarios (p=0,012), la presencia de metástasis en ganglios linfáticos (p = 0,0036) y el índice proliferativo de los tumores metastásicos (p = 0,0353). No se encontraron asociaciones significativas con otras características clínico-patológicas ni con la evolución clínica en la población de estudio. Los resultados obtenidos abren la posibilidad de considerar el status mutacional del oncogén BRAF como factor pronóstico, con el fin de mejorar la estadificación del MC.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica