Estudio de la actividad citotóxica del compuesto Lurbinectedin sobre células leucocitarias normales y malignas de leucemia linfática crónica

• Autores: De Los Ríos Alicandú, María Mercedes
• Año de publicación: 2014
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Giordano, Mirta; Lazarowski, Alberto; Lanari, Claudia; Carballo, Marta
• Materia: Citotoxicidad; Lurbinectedin; Leucemia linfática crónica; Ciencia de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Background: Lurbinectedin, an alkylating minor groove DNA-binder, has cytotoxic\nactivity against different solid tumors, but it has not been evaluated in hematological\nmalignancies yet. Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most frequent leukemia in the adult and, despite the therapeutic advances made in recent years, it remains an\nincurable disease. The survival and proliferation of malignant B cells in CLL depend on\ntumor microenvironment signals which are given by non-malignant leukocytes, stromal\nand endothelial cells.\nObjectives: To investigate the cytotoxic activity of Lurbinectedin on human leukocyte\npopulations, comparing the sensitivity of B, T, NK cells and monocytes from healthy\ndonors and patients with CLL. To analyze the mechanism of cell death induced by\nLurbinectedin.\nMaterials and Methods: Isolation of human peripheral blood leukocytes and in vitro\nincubation with Lurbinectedin. Assessment of cell death with the fluorescent probe 7-\nAAD and flow cytometry analysis. Identification of leukocyte populations by specific\nantibodies. Detection of DNA breaks by evaluating ?H2AX expression by flow cytometry. Detection of PARP cleavage by Western blot.\nResults: Lurbinectedin induces cell death in a dose-dependent manner over all\nleukocyte populations evaluated, being normal and leukemic B cells and myeloid cells\nmore sensitive than T lymphocytes and NK cells. In samples from patients with CLL,\nLurbinectedin reduces viability of leukemic B cells through the elimination of nurse like\ncells differentiated from monocytes. The cytotoxic mechanism in CLL cells involves\nphosphorylation of histone H2AX and PARP fragmentation.\nConclusion: Lurbinectedin is an effective cytotoxic agent against leukemic B cells from\nCLL patients, inducing not only a direct but also an indirect effect by removing nurse\nlike cells that promote leukemic cells survival. Decreased sensitivity of T and NK cells to\nLurbinectedin would be an advantage for the treatment these patients who present a\ntypical immunosuppression.
Fil: De Los Ríos Alicandú, María Mercedes. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Antecedentes: Lurbinectedin, un alcaloide capaz de unirse al surco menor del ADN,\npresenta actividad antitumoral contra diferentes tumores sólidos, pero no ha sido\nevaluado aún en neoplasias hematológicas. La leucemia linfática crónica (LLC) es la\nleucemia más frecuente del adulto y pese a los avances terapeúticos logrados en los\núltimos años sigue siendo una enfermedad incurable. La supervivencia y multiplicación\nde las células B malignas en LLC dependen de señales del microambiente tumoral que\nestán dadas por leucocitos no malignos, células estromales y endoteliales.\nObjetivos: Investigar la actividad citotóxica de Lurbinectedin sobre poblaciones\nleucocitarias humanas, evaluando la sensibilidad de los linfocitos B, T, células NK y\nmonocitos de donantes sanos y pacientes con LLC. Investigar además el mecanismo de\nmuerte celular inducido por Lurbinectedin.\nMateriales y Métodos: Separación de leucocitos de sangre periférica humana e\nincubación con Lurbinectedin. Evaluación de la muerte celular con la sonda\nfluorescente 7-AAD y análisis por citometría de flujo. Identificación de las poblaciones\nleucocitarias con anticuerpos específicos. Detección de la ruptura del ADN por\nevaluación de la expresión de ?H2AX por citometría de flujo. Detección de la\nfragmentación de PARP por Western blot.\nResultados: Lurbinectedin induce muerte celular de manera dosis-dependiente sobre\ntodas las poblaciones leucocitarias evaluadas, siendo los linfocitos B normales y\nleucémicos y las células de estirpe mieloide más sensibles que los linfocitos T y las\ncélulas NK. En muestras de pacientes LLC, Lurbinectedin afecta la viabilidad de las\ncélulas B leucémicas a través de la eliminación de las células de tipo nodriza\ndiferenciadas de monocitos. El mecanismo citotóxico en células LLC involucra la\nfosforilación de la histona H2AX y la fragmentación de PARP.\nConclusiones: Lurbinectedin es un agente citotóxico eficaz contra células B leucémicas\nde pacientes LLC ejerciendo no sólo un efecto directo si no también indirecto a través\nde la eliminación de las células de estirpe nodriza que colaboran con la supervivencia\nde las células leucémicas. La menor sensibilidad de los linfocitos T y células NK\nsupondría una ventaja para el tratamiento de estos pacientes que presentan una\ninmunosupresión característica.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica