Desarrollo de vectores adenovirales genéticamente optimizados como candidatos vacunales frente al Virus de la Fiebre Aftosa

• Autores: Ziraldo, Micaela
• Año de publicación: 2022
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mbayed, Viviana; D'Antuono, Alejandra; Sanchez Alberti, Andres; Mundo, Silvia; De los Santos, Teresa
• Materia: Virus de la fiebre aftosa; Adenovirus humano tipo 5 no replicativo; Proteína VP2 mutante; Partículas tipo virus; Anticuerpos neutralizantes; Respuesta inmune; Foot-and-mouth disease virus; Replication-defective human adenovirus type 5; Mutated VP2 capsid protein; Virus-like particles O1/Campos; Neutralizing antibodies; Immune response; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Despite the success of adenovirus vectors (Ad5) as vaccine candidates for several Foot-and-mouth Disease (FMDV) strains, reproducible and trustworthy results have been difficult to achieve for the epidemiologically relevant O1/Campos strain. In this work, we hypothesized that enhanced expression of FMDV capsid proteins and their self-association into virus-like particles (VLP) would improve the efficacy of an Ad5-O1/C vaccine. We generated the Ad5[PVP2]INV which contains an optimized cassette inserted in a leftward orientation relative to the Ad5 genome and the substitutions S93F/Y98F within VP2, predicted to stabilize FMDV particles. Cells infected with Ad5[PVP2]INV showed an ?14-fold increase of FMDV protein expression than the unmodified Ad5[P]. FMDV-like particles expressed by Ad5[PVP2]INV, which displayed similar thermostability to naturally-generated empty particles, were observed by electron microscopy. Infection of mouse dendritic cells with Ad5[PVP2]INV induced a higher upregulation of CD80 and CD86 than Ad5[P], in a dose-dependent kinetics. Inoculation of Ad5[PVP2]INV promoted higher total and neutralizing O1/C antibodies titers, as compared to Ad5[P], and protected 94 % of mice from homologous challenge. In conclusion, increased protein expression and stabilization of in situ generated VLP improved the performance of an Ad5-O1/Campos vaccine in a well-supported model, providing optimistic expectations to be tested in target animals.
Fil: Ziraldo, Micaela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Candidatos vacunales basados en adenovirus humano tipo 5 (Ad5) frente a la cepa O1/Campos del Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) mostraron resultados de eficacia poco consistentes. El objetivo del trabajo es desarrollar Ad5 que favorezcan la producción in situ de proteínas capsidales del VFA y su ensamblado en partículas tipo virus (PTV), y que protejan contra el VFA. Para ello, generamos el Ad5[PVP2]INV que contiene la unidad de expresión optimizada, insertada en sentido inverso respecto al genoma adenoviral, y las sustituciones estabilizantes S93F/Y98F en la proteína capsidal VP2. Células infectadas con Ad5[PVP2]INV acumularon niveles 14 veces mayores de proteínas capsidales, respecto al Ad5[P] no optimizado. PTV expresadas a través de Ad5[PVP2]INV, que presentan una termoestabilidad similar a las cápsides vacías naturales, se observaron mediante microscopía electrónica. Células dendríticas de ratón infectadas con Ad5[PVP2]INV expresaron mayores niveles de CD80 y CD86, de forma dependiente de la dosis. El 95 % de los ratones inoculados con Ad5[PVP2]INV resultaron protegidos frente al desafío homólogo, exhibiendo títulos de anticuerpos totales y neutralizantes superiores respecto al Ad5[P]. El incremento de las proteínas capsidales y la formación in situ de PTV mejoró el desempeño del Ad5-O1/Campos, alentando su evaluación en especies susceptibles.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Biológicas