Desarrollo, validación y aplicación de métodos inmunoenzimáticos para evaluación de actividad viral del virus de la fiebre aftosa

• Autores: Pérez Visñuk, Marcos Ariel
• Año de publicación: 2026
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Bergmann, Ingrid E.; Malirat, Viviana
• Materia: Virus de la Fiebre Aftosa; ELISA indirecto; Proteínas no capsidales; Validación; Sueros de referencia; Paneles de sueros de referencia; Foot-and-Mouth Disease Virus; ELISA indirect; Non-capsidial proteins; Validation; Reference sera; Reference serum panels; Fiebre Aftosa; Test de ELISA; Ciencias Veterinarias
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Foot-and-Mouth Disease (FMD) is one of the most important diseases affecting cloven hoofed domestic animals, causing major economic losses in affected countries, and is notifiable to the World Organisation for Animal Health (WOAH). This viral disease is highly contagious and spreads rapidly, particularly during the acute phase. The ability of the Foot-and-Mouth Disease Virus (FMDV) to establish subclinical and persistent infections, even in vaccinated animals, is relevant for the implementation of control measures. Argentina is internationally recognized by the WOAH as an FMD-free country, with two differentiated regions: one free without vaccination and another free with systematic vaccination. Maintaining the health status in the vaccinated zones requires demonstrating the absence of viral activity through the detection of antibodies against non-capsid proteins (NCP) of the virus in population-based serological surveys. In this context, the general objective of this thesis was to develop indirect ELISA assays based on the FMDV 3ABC and 3B proteins, capable of meeting this diagnostic need. Primarily, this development was based on the selection, establishment, and characterization of reference standard sera, which were essential for the development and validation of the assays, as well as on the generation of serum panels suitable for various purposes, including the comparative evaluation of diagnostic and analytical sensitivity and analytical specificity, inter-laboratory proficiency testing, and quality control of batches during both the production process and in the final product. The results demonstrated that the I-ELISA 3ABC assay achieved diagnostic sensitivity and specificity values of 100% and 98.3%, respectively, confirming its capability to reliably demonstrate the absence of FMDV viral activity. Meanwhile, the I-ELISA 3B assay showed promising results for use as a confirmatory test for sera with positive or borderline results in the I-ELISA 3ABC. Both assays were successfully established in diagnostic kit format. The reference sera and sera panels selected and characterized in this thesis were a central component for the thorough development and validation of the methodologies described, as well as for comparative performance evaluations over time and against other assays available for this purpose. The characteristics of these sera-broad range of reactivities, satisfactory stability, and proven ability to comparatively assess analytical sensitivity and specificity, as well as diagnostic sensitivity-as demonstrated by the obtained results, support their usefulness and reliability, strengthen the diagnostic foundation, and enable their use as reference materials in other laboratories.
Fil: Pérez Visñuk, Marcos Ariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Buenos Aires, Argentina
La Fiebre Aftosa (FA) es una de las enfermedades más importantes de los animales domésticos biungulados que genera grandes pérdidas económicas en países afectados, siendo de notificación obligatoria ante la Organización Mundial de Sanidad Animal (OMSA). Esta enfermedad viral es altamente contagiosa y de rápida diseminación, particularmente durante la fase aguda. La capacidad del virus de la fiebre aftosa (VFA) de establecer infección subclínica y persistente, inclusive en animales vacunados, es relevante para el establecimiento de medidas de control. Argentina es reconocida internacionalmente por la OMSA como país libre de FA, con dos regiones diferenciadas: una libre sin vacunación y otra libre con vacunación sistemática. El mantenimiento del status sanitario en las zonas bajo vacunación requiere demostrar la ausencia de actividad viral, mediante la detección de anticuerpos contra proteínas no capsidales (PNC) del virus en muestreos serológicos poblacionales. En este contexto, el objetivo general de esta tesis fue desarrollar ensayos de ELISA indirecto, basados en las proteínas 3ABC y 3B del VFA, capaces de responder a esta necesidad diagnóstica. De manera primordial, este desarrollo se sustentó en la selección, constitución y caracterización de sueros estándares de referencia, esenciales para el desarrollo y validación de dichas pruebas y de paneles de sueros, idóneos para diferentes finalidades que incluyeron la evaluación comparativa de sensibilidad diagnóstica y analítica y de especificidad analítica, ensayos de competencia de laboratorios, y control de calidad de lotes durante el proceso de elaboración y en producto final. Los resultados obtenidos demostraron que el ensayo I-ELISA 3ABC alcanzó valores de sensibilidad y especificidad diagnósticas del 100% y 98.3%, respectivamente, evidenciando su capacidad para la demostración fehaciente de ausencia de actividad viral del VFA. Por su parte, el ensayo I-ELISA 3B mostró resultados promisorios para ser empleado como prueba confirmatoria en sueros con valor positivo o cercanos al valor de corte del I-ELISA 3ABC. Ambos ensayos fueron establecidos satisfactoriamente en formato de estuches diagnósticos. Los sueros de referencia y paneles de sueros seleccionados y caracterizados en esta tesis, fueron un eje central para el desarrollo y validación exhaustivo de las metodologías referidas y para evaluaciones del desempeño comparativo en el tiempo y con otros ensayos disponibles para esta finalidad. Las características de estos sueros-amplia gama de reactividades, estabilidad satisfactoria y capacidad de evaluar comparativamente sensibilidad y especificidad analíticas, y sensibilidad diagnóstica - demostradas a partir de los resultados obtenidos, respaldan su utilidad y confiabilidad, fortalecen la base diagnóstica y pueden emplearse como materiales de referencia en otros laboratorios.
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Veterinarias