La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales

Autores
López, María del Rosario; Alonso, Guillermo Daniel; Ocampo, Josefina
Año de publicación
2022
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, alternando entre un insecto vector y un mamífero hospedador. Durante esa alternancia sufre cambios que requieren de una regulación génica precisa. Si bien en T. cruzi la principal regulación de la expresión génica es post transcripcional, la transcripción puede modularse por modificaciones post traduccionales de histonas que alteran la cromatina y afectan la compactación del ADN. T. cruzi cuenta con dos isoformas de las proteínas metiltransferasas Dot1 que metilan la lisina 76 de la histona H3. Mediante estudios previos de cepas doble y simple knockout para dichos genes, se describió que TcDot1a, es responsable de mono y di metilar, y TcDot1b, principalmente de tri metilar. Sin embargo, sus respectivas actividades enzimáticas aún no fueron evaluadas de manera independiente.Para comprender mejor la capacidad de cada una de llevar a cabo la actividad metiltransferasa, se transformó la cepa mutante de S. cerevisiae, dot1Δ, con las proteínas TcDot1a y TcDot1b, por separado, clonadas en el plásmido pRS416. Ambas fueron etiquetadas con hemaglutinina (HA) posibilitando la confirmación de su expresión mediante Western blot. La cepa dot1Δ es resistente al golpe de calor. Con el fin de evidenciar si la incorporación de cada proteína de T. cruzi puede rescatar dicho fenotipo, se expusieron las levaduras transformadas a un heat shock seguido de una incubación a 30° por 48 horas. Pudimos observar que la incorporación de ambas proteínas, de manera independiente, rescatan el fenotipo observado en la dot1Δ; otorgándole sensibilidad al golpe térmico. Como control se utilizó la cepa BY4741 wild type. Con los resultados obtenidos podemos concluir que ambas proteínas tendrían capacidad metiltransferasa independientemente de la presencia de la otra isoforma. Para poder corroborar el patrón de metilación mediado por cada una, complementaremos este estudio analizando los niveles de metilación de H3K76 con anticuerpos específicos.
Fil: López, María del Rosario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Ocampo, Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
XXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Protozoología
Materia
DOT1
TRYPANOSOMATIDOS
COMPLEMENTACIÓN HETEROLOGA
SACHAROMICES CEREVISIAE
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identificador
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/228251
Acceder
id CONICETDig_f5608674674bfbaed684baafb9508130
oai_identifier_str oai:ri.conicet.gov.ar:11336/228251
network_acronym_str CONICETDig
repository_id_str 3498
network_name_str CONICET Digital (CONICET)
spelling La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionalesLópez, María del RosarioAlonso, Guillermo DanielOcampo, JosefinaDOT1TRYPANOSOMATIDOSCOMPLEMENTACIÓN HETEROLOGASACHAROMICES CEREVISIAEhttps://purl.org/becyt/ford/1.6https://purl.org/becyt/ford/1Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, alternando entre un insecto vector y un mamífero hospedador. Durante esa alternancia sufre cambios que requieren de una regulación génica precisa. Si bien en T. cruzi la principal regulación de la expresión génica es post transcripcional, la transcripción puede modularse por modificaciones post traduccionales de histonas que alteran la cromatina y afectan la compactación del ADN. T. cruzi cuenta con dos isoformas de las proteínas metiltransferasas Dot1 que metilan la lisina 76 de la histona H3. Mediante estudios previos de cepas doble y simple knockout para dichos genes, se describió que TcDot1a, es responsable de mono y di metilar, y TcDot1b, principalmente de tri metilar. Sin embargo, sus respectivas actividades enzimáticas aún no fueron evaluadas de manera independiente.Para comprender mejor la capacidad de cada una de llevar a cabo la actividad metiltransferasa, se transformó la cepa mutante de S. cerevisiae, dot1Δ, con las proteínas TcDot1a y TcDot1b, por separado, clonadas en el plásmido pRS416. Ambas fueron etiquetadas con hemaglutinina (HA) posibilitando la confirmación de su expresión mediante Western blot. La cepa dot1Δ es resistente al golpe de calor. Con el fin de evidenciar si la incorporación de cada proteína de T. cruzi puede rescatar dicho fenotipo, se expusieron las levaduras transformadas a un heat shock seguido de una incubación a 30° por 48 horas. Pudimos observar que la incorporación de ambas proteínas, de manera independiente, rescatan el fenotipo observado en la dot1Δ; otorgándole sensibilidad al golpe térmico. Como control se utilizó la cepa BY4741 wild type. Con los resultados obtenidos podemos concluir que ambas proteínas tendrían capacidad metiltransferasa independientemente de la presencia de la otra isoforma. Para poder corroborar el patrón de metilación mediado por cada una, complementaremos este estudio analizando los niveles de metilación de H3K76 con anticuerpos específicos.Fil: López, María del Rosario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Ocampo, Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaXXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de ProtozoologíaSociedad Argentina de Protozoología2022info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectCongresoJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/228251La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales; XXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2022; 52-522953-447XCONICET DigitalCONICETspainfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://protozoologia.org.ar/wp-content/uploads/PARASITUS-Vol.1-2022.pdfNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-29T09:55:23Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/228251instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-29 09:55:23.674CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
dc.title.none.fl_str_mv La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
title La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
spellingShingle La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
López, María del Rosario
DOT1
TRYPANOSOMATIDOS
COMPLEMENTACIÓN HETEROLOGA
SACHAROMICES CEREVISIAE
title_short La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
title_full La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
title_fullStr La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
title_full_unstemmed La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
title_sort La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales
dc.creator.none.fl_str_mv López, María del Rosario
Alonso, Guillermo Daniel
Ocampo, Josefina
author López, María del Rosario
author_facet López, María del Rosario
Alonso, Guillermo Daniel
Ocampo, Josefina
author_role author
author2 Alonso, Guillermo Daniel
Ocampo, Josefina
author2_role author
author
dc.subject.none.fl_str_mv DOT1
TRYPANOSOMATIDOS
COMPLEMENTACIÓN HETEROLOGA
SACHAROMICES CEREVISIAE
topic DOT1
TRYPANOSOMATIDOS
COMPLEMENTACIÓN HETEROLOGA
SACHAROMICES CEREVISIAE
purl_subject.fl_str_mv https://purl.org/becyt/ford/1.6
https://purl.org/becyt/ford/1
dc.description.none.fl_txt_mv Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, alternando entre un insecto vector y un mamífero hospedador. Durante esa alternancia sufre cambios que requieren de una regulación génica precisa. Si bien en T. cruzi la principal regulación de la expresión génica es post transcripcional, la transcripción puede modularse por modificaciones post traduccionales de histonas que alteran la cromatina y afectan la compactación del ADN. T. cruzi cuenta con dos isoformas de las proteínas metiltransferasas Dot1 que metilan la lisina 76 de la histona H3. Mediante estudios previos de cepas doble y simple knockout para dichos genes, se describió que TcDot1a, es responsable de mono y di metilar, y TcDot1b, principalmente de tri metilar. Sin embargo, sus respectivas actividades enzimáticas aún no fueron evaluadas de manera independiente.Para comprender mejor la capacidad de cada una de llevar a cabo la actividad metiltransferasa, se transformó la cepa mutante de S. cerevisiae, dot1Δ, con las proteínas TcDot1a y TcDot1b, por separado, clonadas en el plásmido pRS416. Ambas fueron etiquetadas con hemaglutinina (HA) posibilitando la confirmación de su expresión mediante Western blot. La cepa dot1Δ es resistente al golpe de calor. Con el fin de evidenciar si la incorporación de cada proteína de T. cruzi puede rescatar dicho fenotipo, se expusieron las levaduras transformadas a un heat shock seguido de una incubación a 30° por 48 horas. Pudimos observar que la incorporación de ambas proteínas, de manera independiente, rescatan el fenotipo observado en la dot1Δ; otorgándole sensibilidad al golpe térmico. Como control se utilizó la cepa BY4741 wild type. Con los resultados obtenidos podemos concluir que ambas proteínas tendrían capacidad metiltransferasa independientemente de la presencia de la otra isoforma. Para poder corroborar el patrón de metilación mediado por cada una, complementaremos este estudio analizando los niveles de metilación de H3K76 con anticuerpos específicos.
Fil: López, María del Rosario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Ocampo, Josefina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
XXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Protozoología
description Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, alternando entre un insecto vector y un mamífero hospedador. Durante esa alternancia sufre cambios que requieren de una regulación génica precisa. Si bien en T. cruzi la principal regulación de la expresión génica es post transcripcional, la transcripción puede modularse por modificaciones post traduccionales de histonas que alteran la cromatina y afectan la compactación del ADN. T. cruzi cuenta con dos isoformas de las proteínas metiltransferasas Dot1 que metilan la lisina 76 de la histona H3. Mediante estudios previos de cepas doble y simple knockout para dichos genes, se describió que TcDot1a, es responsable de mono y di metilar, y TcDot1b, principalmente de tri metilar. Sin embargo, sus respectivas actividades enzimáticas aún no fueron evaluadas de manera independiente.Para comprender mejor la capacidad de cada una de llevar a cabo la actividad metiltransferasa, se transformó la cepa mutante de S. cerevisiae, dot1Δ, con las proteínas TcDot1a y TcDot1b, por separado, clonadas en el plásmido pRS416. Ambas fueron etiquetadas con hemaglutinina (HA) posibilitando la confirmación de su expresión mediante Western blot. La cepa dot1Δ es resistente al golpe de calor. Con el fin de evidenciar si la incorporación de cada proteína de T. cruzi puede rescatar dicho fenotipo, se expusieron las levaduras transformadas a un heat shock seguido de una incubación a 30° por 48 horas. Pudimos observar que la incorporación de ambas proteínas, de manera independiente, rescatan el fenotipo observado en la dot1Δ; otorgándole sensibilidad al golpe térmico. Como control se utilizó la cepa BY4741 wild type. Con los resultados obtenidos podemos concluir que ambas proteínas tendrían capacidad metiltransferasa independientemente de la presencia de la otra isoforma. Para poder corroborar el patrón de metilación mediado por cada una, complementaremos este estudio analizando los niveles de metilación de H3K76 con anticuerpos específicos.
publishDate 2022
dc.date.none.fl_str_mv 2022
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
info:eu-repo/semantics/conferenceObject
Congreso
Journal
http://purl.org/coar/resource_type/c_5794
info:ar-repo/semantics/documentoDeConferencia
status_str publishedVersion
format conferenceObject
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/11336/228251
La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales; XXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2022; 52-52
2953-447X
CONICET Digital
CONICET
url http://hdl.handle.net/11336/228251
identifier_str_mv La expresión heteróloga de las isoformas Dot1a y Dot1b de Trypanosoma cruzi rescata el fenotipo salvaje en levaduras mutantes condicionales; XXXIII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2022; 52-52
2953-447X
CONICET Digital
CONICET
dc.language.none.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://protozoologia.org.ar/wp-content/uploads/PARASITUS-Vol.1-2022.pdf
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
dc.coverage.none.fl_str_mv Nacional
dc.publisher.none.fl_str_mv Sociedad Argentina de Protozoología
publisher.none.fl_str_mv Sociedad Argentina de Protozoología
dc.source.none.fl_str_mv reponame:CONICET Digital (CONICET)
instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
reponame_str CONICET Digital (CONICET)
collection CONICET Digital (CONICET)
instname_str Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.name.fl_str_mv CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.mail.fl_str_mv dasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.ar
_version_ 1844613670402785280
score 13.070432

Publicaciones similares