Fibronectin-binding integrins participate in the control of GEF-H1 activation and its role in breast cancer
- Autores
- Fernández Chávez, Lucía; Bermúdez, Vicente; Alonso, Exequiel Gonzalo; Schweitzer, Karen; Ferronato, María Julia; Fermento, María Eugenia; Alonso, Eliana Noelia; Facchinetti, Maria Marta; Curino, Alejandro Carlos; Colo, Georgina Pamela
- Año de publicación
- 2022
- Idioma
- inglés
- Tipo de recurso
- documento de conferencia
- Estado
- versión publicada
- Descripción
- Rho family of small GTPases plays a crucial role in several biolog- ical processes and cycles between on and off states. This switch is controlled by GEFs (Rho-activators) and GAPs (Rho-inhibitors). We have previously identified by Mass Spectrometry (MS) analysis that GEF-H1 is the major GEF that activates RhoA and we observed a significant GEF-H1 overexpression in human breast cancer biop- sies compared with normal breast tissue. The aim of this work is to study the role of GEF-H1 depletion in tumor development and the mechanism of GEF-H1 fibronectin (FN)-binding integrins de- pendent activation. Using CRISPR/Cas9 technology, we generated GEF-H1-knock out (KO) cells in a murine invasive breast cancer cell line (LM3). GEF-H1-KO cells were implanted subcutaneously in the mammary fat pad of BALB/c mice, showing a significant decrease in tumor formation (n=14, p<0.0004), lung metastasis development (n=12, p<0.0348) and an increase in apoptosis (BAX staining n=12, p<0.0001) compared with mice inoculated with WT cancer cells. In order to study the mechanism of GEF-H1 activation, we used mouse fibroblasts that only express FN-binding integrins (pKO-α5β1 or -αvβ3). After immunostaining we observed that αvβ3 integrins trig- gers the dissociation of GEF-H1 from microtubules, leading to RhoA activation, stress fibers (SF) formation and focal adhesions (FA) maturation. The opposite effects were observed after GEF-H1 de- pletion, suggesting that αvβ3 integrins control RhoA activity thought GEF-H1 activation. After analyzing pKO-fibroblast MS-phosphopro- teomics data and looking in several phospho-sites databases, com- bined with different kinase inhibitors assays, we found MARK2/3 as a candidate for GEF-H1 phosphorylation. Indeed, S151 was found as the main site involved in the regulation of GEF-H1 localization and activity. These findings indicate that activation of GEF-H1/RhoA is orchestrated in FN-adherent cells in an integrin-specific manner and promotes tumor and metastatic processes.
Fil: Fernández Chávez, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Bermúdez, Vicente. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Alonso, Exequiel Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina
Fil: Schweitzer, Karen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Ferronato, María Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Fermento, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Alonso, Eliana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Facchinetti, Maria Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Curino, Alejandro Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: Colo, Georgina Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Reunión Conjunta SAIC SAI & FAIC SAFIS 2022; LXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología & 3er Congreso Franco Argentino de Inmunología; Reunión Anual 2022 de la Sociedad Argentina de Fisiología
Mar del Plata
Argentina
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Sociedad Argentina de Inmunología
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- acceso abierto
- Condiciones de uso
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The aim of this work is to study the role of GEF-H1 depletion in tumor development and the mechanism of GEF-H1 fibronectin (FN)-binding integrins de- pendent activation. Using CRISPR/Cas9 technology, we generated GEF-H1-knock out (KO) cells in a murine invasive breast cancer cell line (LM3). GEF-H1-KO cells were implanted subcutaneously in the mammary fat pad of BALB/c mice, showing a significant decrease in tumor formation (n=14, p<0.0004), lung metastasis development (n=12, p<0.0348) and an increase in apoptosis (BAX staining n=12, p<0.0001) compared with mice inoculated with WT cancer cells. In order to study the mechanism of GEF-H1 activation, we used mouse fibroblasts that only express FN-binding integrins (pKO-α5β1 or -αvβ3). After immunostaining we observed that αvβ3 integrins trig- gers the dissociation of GEF-H1 from microtubules, leading to RhoA activation, stress fibers (SF) formation and focal adhesions (FA) maturation. The opposite effects were observed after GEF-H1 de- pletion, suggesting that αvβ3 integrins control RhoA activity thought GEF-H1 activation. After analyzing pKO-fibroblast MS-phosphopro- teomics data and looking in several phospho-sites databases, com- bined with different kinase inhibitors assays, we found MARK2/3 as a candidate for GEF-H1 phosphorylation. Indeed, S151 was found as the main site involved in the regulation of GEF-H1 localization and activity. These findings indicate that activation of GEF-H1/RhoA is orchestrated in FN-adherent cells in an integrin-specific manner and promotes tumor and metastatic processes.Fil: Fernández Chávez, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Bermúdez, Vicente. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Alonso, Exequiel Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Schweitzer, Karen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Ferronato, María Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Fermento, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Alonso, Eliana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Facchinetti, Maria Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Curino, Alejandro Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Colo, Georgina Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaReunión Conjunta SAIC SAI & FAIC SAFIS 2022; LXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología & 3er Congreso Franco Argentino de Inmunología; Reunión Anual 2022 de la Sociedad Argentina de FisiologíaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de FisiologíaFundación Revista MedicinaAlonso, Daniel FernandoMalchiodi, Emilio LuisVila Petroff, Martin GerardeLamb, Caroline Ana2022info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectCongresoJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/227142Fibronectin-binding integrins participate in the control of GEF-H1 activation and its role in breast cancer; Reunión Conjunta SAIC SAI & FAIC SAFIS 2022; LXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología & 3er Congreso Franco Argentino de Inmunología; Reunión Anual 2022 de la Sociedad Argentina de Fisiología; Mar del Plata; Argentina; 2022; 232-2320025-76801669-9106CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.saic.org.ar/revista-medicinaNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-10T13:20:53Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/227142instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-10 13:20:53.796CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse |
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After analyzing pKO-fibroblast MS-phosphopro- teomics data and looking in several phospho-sites databases, com- bined with different kinase inhibitors assays, we found MARK2/3 as a candidate for GEF-H1 phosphorylation. Indeed, S151 was found as the main site involved in the regulation of GEF-H1 localization and activity. These findings indicate that activation of GEF-H1/RhoA is orchestrated in FN-adherent cells in an integrin-specific manner and promotes tumor and metastatic processes. Fil: Fernández Chávez, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Bermúdez, Vicente. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Alonso, Exequiel Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentina Fil: Schweitzer, Karen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Ferronato, María Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Fermento, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Alonso, Eliana Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: Facchinetti, Maria Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. 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Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Reunión Conjunta SAIC SAI & FAIC SAFIS 2022; LXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología & 3er Congreso Franco Argentino de Inmunología; Reunión Anual 2022 de la Sociedad Argentina de Fisiología Mar del Plata Argentina Sociedad Argentina de Investigación Clínica Sociedad Argentina de Inmunología Sociedad Argentina de Fisiología |
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