Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní

Autores
Monguillot, Joaquín Humberto; Bernardi, Lima Nelson; Paredes, Juan Andrés; Giordano, Damian Francisco; Oddino, Claudio Marcelo; Rago, Alejandro Mario; Carmona, Marcelo; Conforto, Cinthia
Año de publicación
2023
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
El cultivo de maní (Arachis hypogaea L.) es afectado por dos enfermedades foliares importantes, la viruela temprana (Cercospora arachidicola) y la viruela tardía (Nothopassalora personata Syn. Cercosporidium personatum). En Argentina la viruela tardía, por su distribución y presencia en todos los ciclos agrícolas de las últimas décadas, es la enfermedad foliar con mayor potencial de daño para el cultivo. Actualmente la herramienta de control más eficiente es el uso de fungicidas, principalmente sitios específicos, que, por su uso sistemático, conlleva a un alto riesgo de desarrollar resistencia en las poblaciOnes del patógeno. Entre las características de N. personata se incluyen una baja capacidad de producir conidios en condiciones in vitro y un lento crecimiento micelial en medios de laboratorio estándar, lo que limita los estudios de etiología y epidemiología, así como una mejor comprensión de su biología (Monguillot et al., 2023). Dado el número limitado de estudios y la importancia de este patógeno en el cultivo de maní, el objetivo de este estudio fue caracterizar morfológica y molecularmente aislamientos de N. personata obtenidos de distintas áreas de producción de Córdoba, Argentina, y evaluar su patogenicidad.Materiales y Métodos Aislamiento: N. personata fue aislado de hojas sintomáticas colectadas en la campaña 2019-20 de seis loteslocalizados en Rio Cuarto, Las Perdices, General Deheza, Vicuña Mackenna, Pampayasta Sur y General Cabrera, mediante el método de aislamiento directo. Previo al aislamiento las hojas fueron desinfectadas y mantenidas en cámara húmeda por 72 h. Tejido estromático junto a conidióforos y conidios fueron transferidos a placas de Petri conteniendo agar agua (AA) con el objetivo de obtener conidios individuales que posteriormente fueron transferidos a placas con medio POA (extracto de hoja de maní+ avena + agar) + D (Dextrosa). Las placas fueron incubadas por diez días a 24 ºC con 12 h-fotoperiodo. Los cultivos puros obtenidos fueron preservados por el método Castellani.Caracterización morfológica: las colonias fueron estudiadas en medio de cultivo Spezieller Nährstof-farmer agar(SNA), luego de un período de incubación de 20 días a 24 °C en condiciones de luz/oscuridad de 12/12 h. La caracterización de los conidios se llevó a cabo en medio de cultivo POA y en planta, midiendo largo y ancho utilizando el software ImageJ.Caracterización molecular: El ADN genómico se extrajo a partir de micelio obtenido en medio líquido (papa dextrosa + extracto de hojas (30 g/L), en agitación continua (130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h) usando el protocolo de Doyle y Doyle (1987) con modificaciones (Conforto et al., 2019). Para la identificación molecular, se realizó la amplificación por la técnica de PCR y posterior secuenciación de los genes LSU, ITS, RPB2 (Videiraet al., 2017). Las secuencias consenso de cada aislado se compararon con la secuencia de la especie tipo de N. personata. El análisis filogenético se realizó mediante inferencia Bayesiana.Crecimiento micelial: fue evaluada en cuatro medios de cultivo: POA, papa dextrosa agar (PDA), extracto de hoja de maní agar (PLA) y extracto de grano de maní agar (PGA). El ensayo se realizó con seis aislados, y con cuatro repeticiones por aislado. Un disco de micelio de 3 mm de diámetro obtenido del margen de las colonias, en activo crecimiento en medio PDA fue transferido a las placas conteniendo los diferentes medios de cultivo. Las placas de Petri se incubaron a 24 °C en 12/12 h luz/oscuridad durante tres semanas. El diámetro de las colonias fue medido en dos direcciones perpendiculares, utilizando un calibre digital. Los datos fueron comparados utilizando ANOVA y las comparaciones de medias se realizaron utilizando Statistix 9.0.Pruebas de patogenicidad: el inóculo de cada uno de los aislados se cultivó individualmente en Erlenmeyers conteniendo 25 ml de medio de cultivo líquido PD + extracto de hojas, partiendo de un disco de micelio (3 mm).La incubación se realizó en un agitador orbital a 130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Después de diez días de incubación, el micelio fue macerado y posteriormente sembrado en placas de Petri conteniendo medioAA. Las placas se incubaron a 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Diez días después, 10 ml de agua destilada estéril + Tween 20% (0,01%) se agregó a cada placa y se retiraron los conidios utilizando una espátula Drigalsky. La suspensión de conidios se recolectó en un tubo eppendorf y la concentración se ajustó a 1 × 104 conidios porml. Las hojas de maní (cv. Granoleico) previa desinfección, se colocaron en placas de Petri y las condiciones de humedad se mantuvieron colocando en el extremo de cada pecíolo un algodón humedecido con 5 ml de agua destilada estéril. Las hojas fueron inoculadas con una gota de 10 µl de la suspensión de conidios. Las placas dePetri se colocaron en una cámara de incubación a 24 °C con un fotoperiodo de 12 h. Las pruebas se realizaron con tres repeticiones por aislado y el experimento fue repetido dos veces.ResultadosSe caracterizaronseis aislados, uno por cada localidad. Los aislados presentaron crecimiento lento (0,45 mm/día), con colonias inicialmente de color blanco, compactas, de borde irregular, con micelio aéreo compuesto de hifas septadas, color pardo-oliváceo. Conidióforos tabicados agregados, surgiendo del tejido estromático, de color marrón pálido a marrón, rectos a curvos o geniculados-sinuosos (en planta e in vitro). Los conidios son solitarios, septados, rectos o ligeramente curvos, de color marrón pálido a marrón, con las siguientes dimensiones: en planta: (22,7) 34,4 (50,4) x (6,4) 7,9 (9) μm, y 1 a 6 septos, in vitro: (28) 44,9 (58,9) x (5,1) 7 (8,4) μm, de 3 a 5 septos.A partir del análisis Bayesiano de inferencia filogenética los seis aislados se agruparon en un clado fuertemente soportado con la especie tipo de N. personata (PP:1.0). De la comparación entre los cuatro medios de cultivo después 21 días, se observó el mayor crecimiento en medio PGA(12,89 mm), seguido de PDA (12,02 mm), PLA (11,88 mm) y POA (10,3 mm). Si bien, no existieron diferencias significativas (LSD p < 0,05) entre los medios PGA y PDA, PGA si difirió significativamente de los medios PLA y POA.En la prueba de patogenicidad, todos los foliolos presentaron síntomas típicos de la viruela del maní. En la superficie adaxial, en el punto de inoculación, los síntomas comenzaron como pequeñas manchas circulares oscuras, en algunos casos se pudo observar la presencia de un halo clorótico. No se observaron síntomas en el control negativo. El patógeno fue re-aislado de las hojas inoculadas, para cumplir con los postulados de Koch.ConclusionesEste es el primer estudio que se realiza en Argentina focalizado en aspectos morfológicos moleculares y de patogenicidad de N. personata agente causal de la viruela tardía del maní.La información generada en este trabajo contribuye a futuros estudios epidemiológicos y de manejo de esta enfermedad.
Fil: Monguillot, Joaquín Humberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Bernardi, Lima Nelson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina. Universidad Nacional de Catamarca; Argentina
Fil: Paredes, Juan Andrés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Giordano, Damian Francisco. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; Argentina
Fil: Oddino, Claudio Marcelo. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; Argentina
Fil: Rago, Alejandro Mario. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Carmona, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Vegetal. Cátedra de Fitopatología; Argentina
Fil: Conforto, Cinthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
XXXVIII Jornada Nacional de Maní
General Cabrera
Argentina
Colegio de Ingenieros Agrónomos General Cabrera
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
Materia
AISLAMIENTOS
NOTHOPASSALORA PERSONATA
VIRUELA DEL MANÍ
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identificador
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/229157
Acceder
id CONICETDig_d588baf58350c1ef08d054faf00fe69a
oai_identifier_str oai:ri.conicet.gov.ar:11336/229157
network_acronym_str CONICETDig
repository_id_str 3498
network_name_str CONICET Digital (CONICET)
spelling Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maníMonguillot, Joaquín HumbertoBernardi, Lima NelsonParedes, Juan AndrésGiordano, Damian FranciscoOddino, Claudio MarceloRago, Alejandro MarioCarmona, MarceloConforto, CinthiaAISLAMIENTOSNOTHOPASSALORA PERSONATAVIRUELA DEL MANÍhttps://purl.org/becyt/ford/4.1https://purl.org/becyt/ford/4https://purl.org/becyt/ford/1.6https://purl.org/becyt/ford/1El cultivo de maní (Arachis hypogaea L.) es afectado por dos enfermedades foliares importantes, la viruela temprana (Cercospora arachidicola) y la viruela tardía (Nothopassalora personata Syn. Cercosporidium personatum). En Argentina la viruela tardía, por su distribución y presencia en todos los ciclos agrícolas de las últimas décadas, es la enfermedad foliar con mayor potencial de daño para el cultivo. Actualmente la herramienta de control más eficiente es el uso de fungicidas, principalmente sitios específicos, que, por su uso sistemático, conlleva a un alto riesgo de desarrollar resistencia en las poblaciOnes del patógeno. Entre las características de N. personata se incluyen una baja capacidad de producir conidios en condiciones in vitro y un lento crecimiento micelial en medios de laboratorio estándar, lo que limita los estudios de etiología y epidemiología, así como una mejor comprensión de su biología (Monguillot et al., 2023). Dado el número limitado de estudios y la importancia de este patógeno en el cultivo de maní, el objetivo de este estudio fue caracterizar morfológica y molecularmente aislamientos de N. personata obtenidos de distintas áreas de producción de Córdoba, Argentina, y evaluar su patogenicidad.Materiales y Métodos Aislamiento: N. personata fue aislado de hojas sintomáticas colectadas en la campaña 2019-20 de seis loteslocalizados en Rio Cuarto, Las Perdices, General Deheza, Vicuña Mackenna, Pampayasta Sur y General Cabrera, mediante el método de aislamiento directo. Previo al aislamiento las hojas fueron desinfectadas y mantenidas en cámara húmeda por 72 h. Tejido estromático junto a conidióforos y conidios fueron transferidos a placas de Petri conteniendo agar agua (AA) con el objetivo de obtener conidios individuales que posteriormente fueron transferidos a placas con medio POA (extracto de hoja de maní+ avena + agar) + D (Dextrosa). Las placas fueron incubadas por diez días a 24 ºC con 12 h-fotoperiodo. Los cultivos puros obtenidos fueron preservados por el método Castellani.Caracterización morfológica: las colonias fueron estudiadas en medio de cultivo Spezieller Nährstof-farmer agar(SNA), luego de un período de incubación de 20 días a 24 °C en condiciones de luz/oscuridad de 12/12 h. La caracterización de los conidios se llevó a cabo en medio de cultivo POA y en planta, midiendo largo y ancho utilizando el software ImageJ.Caracterización molecular: El ADN genómico se extrajo a partir de micelio obtenido en medio líquido (papa dextrosa + extracto de hojas (30 g/L), en agitación continua (130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h) usando el protocolo de Doyle y Doyle (1987) con modificaciones (Conforto et al., 2019). Para la identificación molecular, se realizó la amplificación por la técnica de PCR y posterior secuenciación de los genes LSU, ITS, RPB2 (Videiraet al., 2017). Las secuencias consenso de cada aislado se compararon con la secuencia de la especie tipo de N. personata. El análisis filogenético se realizó mediante inferencia Bayesiana.Crecimiento micelial: fue evaluada en cuatro medios de cultivo: POA, papa dextrosa agar (PDA), extracto de hoja de maní agar (PLA) y extracto de grano de maní agar (PGA). El ensayo se realizó con seis aislados, y con cuatro repeticiones por aislado. Un disco de micelio de 3 mm de diámetro obtenido del margen de las colonias, en activo crecimiento en medio PDA fue transferido a las placas conteniendo los diferentes medios de cultivo. Las placas de Petri se incubaron a 24 °C en 12/12 h luz/oscuridad durante tres semanas. El diámetro de las colonias fue medido en dos direcciones perpendiculares, utilizando un calibre digital. Los datos fueron comparados utilizando ANOVA y las comparaciones de medias se realizaron utilizando Statistix 9.0.Pruebas de patogenicidad: el inóculo de cada uno de los aislados se cultivó individualmente en Erlenmeyers conteniendo 25 ml de medio de cultivo líquido PD + extracto de hojas, partiendo de un disco de micelio (3 mm).La incubación se realizó en un agitador orbital a 130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Después de diez días de incubación, el micelio fue macerado y posteriormente sembrado en placas de Petri conteniendo medioAA. Las placas se incubaron a 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Diez días después, 10 ml de agua destilada estéril + Tween 20% (0,01%) se agregó a cada placa y se retiraron los conidios utilizando una espátula Drigalsky. La suspensión de conidios se recolectó en un tubo eppendorf y la concentración se ajustó a 1 × 104 conidios porml. Las hojas de maní (cv. Granoleico) previa desinfección, se colocaron en placas de Petri y las condiciones de humedad se mantuvieron colocando en el extremo de cada pecíolo un algodón humedecido con 5 ml de agua destilada estéril. Las hojas fueron inoculadas con una gota de 10 µl de la suspensión de conidios. Las placas dePetri se colocaron en una cámara de incubación a 24 °C con un fotoperiodo de 12 h. Las pruebas se realizaron con tres repeticiones por aislado y el experimento fue repetido dos veces.ResultadosSe caracterizaronseis aislados, uno por cada localidad. Los aislados presentaron crecimiento lento (0,45 mm/día), con colonias inicialmente de color blanco, compactas, de borde irregular, con micelio aéreo compuesto de hifas septadas, color pardo-oliváceo. Conidióforos tabicados agregados, surgiendo del tejido estromático, de color marrón pálido a marrón, rectos a curvos o geniculados-sinuosos (en planta e in vitro). Los conidios son solitarios, septados, rectos o ligeramente curvos, de color marrón pálido a marrón, con las siguientes dimensiones: en planta: (22,7) 34,4 (50,4) x (6,4) 7,9 (9) μm, y 1 a 6 septos, in vitro: (28) 44,9 (58,9) x (5,1) 7 (8,4) μm, de 3 a 5 septos.A partir del análisis Bayesiano de inferencia filogenética los seis aislados se agruparon en un clado fuertemente soportado con la especie tipo de N. personata (PP:1.0). De la comparación entre los cuatro medios de cultivo después 21 días, se observó el mayor crecimiento en medio PGA(12,89 mm), seguido de PDA (12,02 mm), PLA (11,88 mm) y POA (10,3 mm). Si bien, no existieron diferencias significativas (LSD p < 0,05) entre los medios PGA y PDA, PGA si difirió significativamente de los medios PLA y POA.En la prueba de patogenicidad, todos los foliolos presentaron síntomas típicos de la viruela del maní. En la superficie adaxial, en el punto de inoculación, los síntomas comenzaron como pequeñas manchas circulares oscuras, en algunos casos se pudo observar la presencia de un halo clorótico. No se observaron síntomas en el control negativo. El patógeno fue re-aislado de las hojas inoculadas, para cumplir con los postulados de Koch.ConclusionesEste es el primer estudio que se realiza en Argentina focalizado en aspectos morfológicos moleculares y de patogenicidad de N. personata agente causal de la viruela tardía del maní.La información generada en este trabajo contribuye a futuros estudios epidemiológicos y de manejo de esta enfermedad.Fil: Monguillot, Joaquín Humberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; ArgentinaFil: Bernardi, Lima Nelson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina. Universidad Nacional de Catamarca; ArgentinaFil: Paredes, Juan Andrés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; ArgentinaFil: Giordano, Damian Francisco. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; ArgentinaFil: Oddino, Claudio Marcelo. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; ArgentinaFil: Rago, Alejandro Mario. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; ArgentinaFil: Carmona, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Vegetal. Cátedra de Fitopatología; ArgentinaFil: Conforto, Cinthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; ArgentinaXXXVIII Jornada Nacional de ManíGeneral CabreraArgentinaColegio de Ingenieros Agrónomos General CabreraInstituto Nacional de Tecnología AgropecuariaInstituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Ingenieros Agrónomos General Cabrera y zona2023info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectJornadaJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/229157Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní; XXXVIII Jornada Nacional de Maní; General Cabrera; Argentina; 2023; 1-22718-9090CONICET DigitalCONICETspainfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.ciacabrera.com.ar/jornada_del_mani/38_jornada_del_mani.htmlNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-03T09:56:48Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/229157instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-03 09:56:49.206CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
dc.title.none.fl_str_mv Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
title Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
spellingShingle Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
Monguillot, Joaquín Humberto
AISLAMIENTOS
NOTHOPASSALORA PERSONATA
VIRUELA DEL MANÍ
title_short Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
title_full Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
title_fullStr Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
title_full_unstemmed Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
title_sort Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní
dc.creator.none.fl_str_mv Monguillot, Joaquín Humberto
Bernardi, Lima Nelson
Paredes, Juan Andrés
Giordano, Damian Francisco
Oddino, Claudio Marcelo
Rago, Alejandro Mario
Carmona, Marcelo
Conforto, Cinthia
author Monguillot, Joaquín Humberto
author_facet Monguillot, Joaquín Humberto
Bernardi, Lima Nelson
Paredes, Juan Andrés
Giordano, Damian Francisco
Oddino, Claudio Marcelo
Rago, Alejandro Mario
Carmona, Marcelo
Conforto, Cinthia
author_role author
author2 Bernardi, Lima Nelson
Paredes, Juan Andrés
Giordano, Damian Francisco
Oddino, Claudio Marcelo
Rago, Alejandro Mario
Carmona, Marcelo
Conforto, Cinthia
author2_role author
author
author
author
author
author
author
dc.subject.none.fl_str_mv AISLAMIENTOS
NOTHOPASSALORA PERSONATA
VIRUELA DEL MANÍ
topic AISLAMIENTOS
NOTHOPASSALORA PERSONATA
VIRUELA DEL MANÍ
purl_subject.fl_str_mv https://purl.org/becyt/ford/4.1
https://purl.org/becyt/ford/4
https://purl.org/becyt/ford/1.6
https://purl.org/becyt/ford/1
dc.description.none.fl_txt_mv El cultivo de maní (Arachis hypogaea L.) es afectado por dos enfermedades foliares importantes, la viruela temprana (Cercospora arachidicola) y la viruela tardía (Nothopassalora personata Syn. Cercosporidium personatum). En Argentina la viruela tardía, por su distribución y presencia en todos los ciclos agrícolas de las últimas décadas, es la enfermedad foliar con mayor potencial de daño para el cultivo. Actualmente la herramienta de control más eficiente es el uso de fungicidas, principalmente sitios específicos, que, por su uso sistemático, conlleva a un alto riesgo de desarrollar resistencia en las poblaciOnes del patógeno. Entre las características de N. personata se incluyen una baja capacidad de producir conidios en condiciones in vitro y un lento crecimiento micelial en medios de laboratorio estándar, lo que limita los estudios de etiología y epidemiología, así como una mejor comprensión de su biología (Monguillot et al., 2023). Dado el número limitado de estudios y la importancia de este patógeno en el cultivo de maní, el objetivo de este estudio fue caracterizar morfológica y molecularmente aislamientos de N. personata obtenidos de distintas áreas de producción de Córdoba, Argentina, y evaluar su patogenicidad.Materiales y Métodos Aislamiento: N. personata fue aislado de hojas sintomáticas colectadas en la campaña 2019-20 de seis loteslocalizados en Rio Cuarto, Las Perdices, General Deheza, Vicuña Mackenna, Pampayasta Sur y General Cabrera, mediante el método de aislamiento directo. Previo al aislamiento las hojas fueron desinfectadas y mantenidas en cámara húmeda por 72 h. Tejido estromático junto a conidióforos y conidios fueron transferidos a placas de Petri conteniendo agar agua (AA) con el objetivo de obtener conidios individuales que posteriormente fueron transferidos a placas con medio POA (extracto de hoja de maní+ avena + agar) + D (Dextrosa). Las placas fueron incubadas por diez días a 24 ºC con 12 h-fotoperiodo. Los cultivos puros obtenidos fueron preservados por el método Castellani.Caracterización morfológica: las colonias fueron estudiadas en medio de cultivo Spezieller Nährstof-farmer agar(SNA), luego de un período de incubación de 20 días a 24 °C en condiciones de luz/oscuridad de 12/12 h. La caracterización de los conidios se llevó a cabo en medio de cultivo POA y en planta, midiendo largo y ancho utilizando el software ImageJ.Caracterización molecular: El ADN genómico se extrajo a partir de micelio obtenido en medio líquido (papa dextrosa + extracto de hojas (30 g/L), en agitación continua (130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h) usando el protocolo de Doyle y Doyle (1987) con modificaciones (Conforto et al., 2019). Para la identificación molecular, se realizó la amplificación por la técnica de PCR y posterior secuenciación de los genes LSU, ITS, RPB2 (Videiraet al., 2017). Las secuencias consenso de cada aislado se compararon con la secuencia de la especie tipo de N. personata. El análisis filogenético se realizó mediante inferencia Bayesiana.Crecimiento micelial: fue evaluada en cuatro medios de cultivo: POA, papa dextrosa agar (PDA), extracto de hoja de maní agar (PLA) y extracto de grano de maní agar (PGA). El ensayo se realizó con seis aislados, y con cuatro repeticiones por aislado. Un disco de micelio de 3 mm de diámetro obtenido del margen de las colonias, en activo crecimiento en medio PDA fue transferido a las placas conteniendo los diferentes medios de cultivo. Las placas de Petri se incubaron a 24 °C en 12/12 h luz/oscuridad durante tres semanas. El diámetro de las colonias fue medido en dos direcciones perpendiculares, utilizando un calibre digital. Los datos fueron comparados utilizando ANOVA y las comparaciones de medias se realizaron utilizando Statistix 9.0.Pruebas de patogenicidad: el inóculo de cada uno de los aislados se cultivó individualmente en Erlenmeyers conteniendo 25 ml de medio de cultivo líquido PD + extracto de hojas, partiendo de un disco de micelio (3 mm).La incubación se realizó en un agitador orbital a 130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Después de diez días de incubación, el micelio fue macerado y posteriormente sembrado en placas de Petri conteniendo medioAA. Las placas se incubaron a 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Diez días después, 10 ml de agua destilada estéril + Tween 20% (0,01%) se agregó a cada placa y se retiraron los conidios utilizando una espátula Drigalsky. La suspensión de conidios se recolectó en un tubo eppendorf y la concentración se ajustó a 1 × 104 conidios porml. Las hojas de maní (cv. Granoleico) previa desinfección, se colocaron en placas de Petri y las condiciones de humedad se mantuvieron colocando en el extremo de cada pecíolo un algodón humedecido con 5 ml de agua destilada estéril. Las hojas fueron inoculadas con una gota de 10 µl de la suspensión de conidios. Las placas dePetri se colocaron en una cámara de incubación a 24 °C con un fotoperiodo de 12 h. Las pruebas se realizaron con tres repeticiones por aislado y el experimento fue repetido dos veces.ResultadosSe caracterizaronseis aislados, uno por cada localidad. Los aislados presentaron crecimiento lento (0,45 mm/día), con colonias inicialmente de color blanco, compactas, de borde irregular, con micelio aéreo compuesto de hifas septadas, color pardo-oliváceo. Conidióforos tabicados agregados, surgiendo del tejido estromático, de color marrón pálido a marrón, rectos a curvos o geniculados-sinuosos (en planta e in vitro). Los conidios son solitarios, septados, rectos o ligeramente curvos, de color marrón pálido a marrón, con las siguientes dimensiones: en planta: (22,7) 34,4 (50,4) x (6,4) 7,9 (9) μm, y 1 a 6 septos, in vitro: (28) 44,9 (58,9) x (5,1) 7 (8,4) μm, de 3 a 5 septos.A partir del análisis Bayesiano de inferencia filogenética los seis aislados se agruparon en un clado fuertemente soportado con la especie tipo de N. personata (PP:1.0). De la comparación entre los cuatro medios de cultivo después 21 días, se observó el mayor crecimiento en medio PGA(12,89 mm), seguido de PDA (12,02 mm), PLA (11,88 mm) y POA (10,3 mm). Si bien, no existieron diferencias significativas (LSD p < 0,05) entre los medios PGA y PDA, PGA si difirió significativamente de los medios PLA y POA.En la prueba de patogenicidad, todos los foliolos presentaron síntomas típicos de la viruela del maní. En la superficie adaxial, en el punto de inoculación, los síntomas comenzaron como pequeñas manchas circulares oscuras, en algunos casos se pudo observar la presencia de un halo clorótico. No se observaron síntomas en el control negativo. El patógeno fue re-aislado de las hojas inoculadas, para cumplir con los postulados de Koch.ConclusionesEste es el primer estudio que se realiza en Argentina focalizado en aspectos morfológicos moleculares y de patogenicidad de N. personata agente causal de la viruela tardía del maní.La información generada en este trabajo contribuye a futuros estudios epidemiológicos y de manejo de esta enfermedad.
Fil: Monguillot, Joaquín Humberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Bernardi, Lima Nelson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina. Universidad Nacional de Catamarca; Argentina
Fil: Paredes, Juan Andrés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Giordano, Damian Francisco. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; Argentina
Fil: Oddino, Claudio Marcelo. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigación en Micología y Micotoxicología; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Biología Agrícola; Argentina
Fil: Rago, Alejandro Mario. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
Fil: Carmona, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Vegetal. Cátedra de Fitopatología; Argentina
Fil: Conforto, Cinthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina
XXXVIII Jornada Nacional de Maní
General Cabrera
Argentina
Colegio de Ingenieros Agrónomos General Cabrera
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria
description El cultivo de maní (Arachis hypogaea L.) es afectado por dos enfermedades foliares importantes, la viruela temprana (Cercospora arachidicola) y la viruela tardía (Nothopassalora personata Syn. Cercosporidium personatum). En Argentina la viruela tardía, por su distribución y presencia en todos los ciclos agrícolas de las últimas décadas, es la enfermedad foliar con mayor potencial de daño para el cultivo. Actualmente la herramienta de control más eficiente es el uso de fungicidas, principalmente sitios específicos, que, por su uso sistemático, conlleva a un alto riesgo de desarrollar resistencia en las poblaciOnes del patógeno. Entre las características de N. personata se incluyen una baja capacidad de producir conidios en condiciones in vitro y un lento crecimiento micelial en medios de laboratorio estándar, lo que limita los estudios de etiología y epidemiología, así como una mejor comprensión de su biología (Monguillot et al., 2023). Dado el número limitado de estudios y la importancia de este patógeno en el cultivo de maní, el objetivo de este estudio fue caracterizar morfológica y molecularmente aislamientos de N. personata obtenidos de distintas áreas de producción de Córdoba, Argentina, y evaluar su patogenicidad.Materiales y Métodos Aislamiento: N. personata fue aislado de hojas sintomáticas colectadas en la campaña 2019-20 de seis loteslocalizados en Rio Cuarto, Las Perdices, General Deheza, Vicuña Mackenna, Pampayasta Sur y General Cabrera, mediante el método de aislamiento directo. Previo al aislamiento las hojas fueron desinfectadas y mantenidas en cámara húmeda por 72 h. Tejido estromático junto a conidióforos y conidios fueron transferidos a placas de Petri conteniendo agar agua (AA) con el objetivo de obtener conidios individuales que posteriormente fueron transferidos a placas con medio POA (extracto de hoja de maní+ avena + agar) + D (Dextrosa). Las placas fueron incubadas por diez días a 24 ºC con 12 h-fotoperiodo. Los cultivos puros obtenidos fueron preservados por el método Castellani.Caracterización morfológica: las colonias fueron estudiadas en medio de cultivo Spezieller Nährstof-farmer agar(SNA), luego de un período de incubación de 20 días a 24 °C en condiciones de luz/oscuridad de 12/12 h. La caracterización de los conidios se llevó a cabo en medio de cultivo POA y en planta, midiendo largo y ancho utilizando el software ImageJ.Caracterización molecular: El ADN genómico se extrajo a partir de micelio obtenido en medio líquido (papa dextrosa + extracto de hojas (30 g/L), en agitación continua (130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h) usando el protocolo de Doyle y Doyle (1987) con modificaciones (Conforto et al., 2019). Para la identificación molecular, se realizó la amplificación por la técnica de PCR y posterior secuenciación de los genes LSU, ITS, RPB2 (Videiraet al., 2017). Las secuencias consenso de cada aislado se compararon con la secuencia de la especie tipo de N. personata. El análisis filogenético se realizó mediante inferencia Bayesiana.Crecimiento micelial: fue evaluada en cuatro medios de cultivo: POA, papa dextrosa agar (PDA), extracto de hoja de maní agar (PLA) y extracto de grano de maní agar (PGA). El ensayo se realizó con seis aislados, y con cuatro repeticiones por aislado. Un disco de micelio de 3 mm de diámetro obtenido del margen de las colonias, en activo crecimiento en medio PDA fue transferido a las placas conteniendo los diferentes medios de cultivo. Las placas de Petri se incubaron a 24 °C en 12/12 h luz/oscuridad durante tres semanas. El diámetro de las colonias fue medido en dos direcciones perpendiculares, utilizando un calibre digital. Los datos fueron comparados utilizando ANOVA y las comparaciones de medias se realizaron utilizando Statistix 9.0.Pruebas de patogenicidad: el inóculo de cada uno de los aislados se cultivó individualmente en Erlenmeyers conteniendo 25 ml de medio de cultivo líquido PD + extracto de hojas, partiendo de un disco de micelio (3 mm).La incubación se realizó en un agitador orbital a 130 rpm, 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Después de diez días de incubación, el micelio fue macerado y posteriormente sembrado en placas de Petri conteniendo medioAA. Las placas se incubaron a 24 °C con un fotoperíodo de 12 h. Diez días después, 10 ml de agua destilada estéril + Tween 20% (0,01%) se agregó a cada placa y se retiraron los conidios utilizando una espátula Drigalsky. La suspensión de conidios se recolectó en un tubo eppendorf y la concentración se ajustó a 1 × 104 conidios porml. Las hojas de maní (cv. Granoleico) previa desinfección, se colocaron en placas de Petri y las condiciones de humedad se mantuvieron colocando en el extremo de cada pecíolo un algodón humedecido con 5 ml de agua destilada estéril. Las hojas fueron inoculadas con una gota de 10 µl de la suspensión de conidios. Las placas dePetri se colocaron en una cámara de incubación a 24 °C con un fotoperiodo de 12 h. Las pruebas se realizaron con tres repeticiones por aislado y el experimento fue repetido dos veces.ResultadosSe caracterizaronseis aislados, uno por cada localidad. Los aislados presentaron crecimiento lento (0,45 mm/día), con colonias inicialmente de color blanco, compactas, de borde irregular, con micelio aéreo compuesto de hifas septadas, color pardo-oliváceo. Conidióforos tabicados agregados, surgiendo del tejido estromático, de color marrón pálido a marrón, rectos a curvos o geniculados-sinuosos (en planta e in vitro). Los conidios son solitarios, septados, rectos o ligeramente curvos, de color marrón pálido a marrón, con las siguientes dimensiones: en planta: (22,7) 34,4 (50,4) x (6,4) 7,9 (9) μm, y 1 a 6 septos, in vitro: (28) 44,9 (58,9) x (5,1) 7 (8,4) μm, de 3 a 5 septos.A partir del análisis Bayesiano de inferencia filogenética los seis aislados se agruparon en un clado fuertemente soportado con la especie tipo de N. personata (PP:1.0). De la comparación entre los cuatro medios de cultivo después 21 días, se observó el mayor crecimiento en medio PGA(12,89 mm), seguido de PDA (12,02 mm), PLA (11,88 mm) y POA (10,3 mm). Si bien, no existieron diferencias significativas (LSD p < 0,05) entre los medios PGA y PDA, PGA si difirió significativamente de los medios PLA y POA.En la prueba de patogenicidad, todos los foliolos presentaron síntomas típicos de la viruela del maní. En la superficie adaxial, en el punto de inoculación, los síntomas comenzaron como pequeñas manchas circulares oscuras, en algunos casos se pudo observar la presencia de un halo clorótico. No se observaron síntomas en el control negativo. El patógeno fue re-aislado de las hojas inoculadas, para cumplir con los postulados de Koch.ConclusionesEste es el primer estudio que se realiza en Argentina focalizado en aspectos morfológicos moleculares y de patogenicidad de N. personata agente causal de la viruela tardía del maní.La información generada en este trabajo contribuye a futuros estudios epidemiológicos y de manejo de esta enfermedad.
publishDate 2023
dc.date.none.fl_str_mv 2023
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
info:eu-repo/semantics/conferenceObject
Jornada
Journal
http://purl.org/coar/resource_type/c_5794
info:ar-repo/semantics/documentoDeConferencia
status_str publishedVersion
format conferenceObject
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/11336/229157
Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní; XXXVIII Jornada Nacional de Maní; General Cabrera; Argentina; 2023; 1-2
2718-9090
CONICET Digital
CONICET
url http://hdl.handle.net/11336/229157
identifier_str_mv Caracterización de aislados de Nothopassalora personata agente causal de la viruela tardía del maní; XXXVIII Jornada Nacional de Maní; General Cabrera; Argentina; 2023; 1-2
2718-9090
CONICET Digital
CONICET
dc.language.none.fl_str_mv spa
language spa
dc.relation.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.ciacabrera.com.ar/jornada_del_mani/38_jornada_del_mani.html
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
dc.coverage.none.fl_str_mv Nacional
dc.publisher.none.fl_str_mv Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Ingenieros Agrónomos General Cabrera y zona
publisher.none.fl_str_mv Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Ingenieros Agrónomos General Cabrera y zona
dc.source.none.fl_str_mv reponame:CONICET Digital (CONICET)
instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
reponame_str CONICET Digital (CONICET)
collection CONICET Digital (CONICET)
instname_str Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.name.fl_str_mv CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.mail.fl_str_mv dasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.ar
_version_ 1842269425679466496
score 13.13397

Publicaciones similares