Mapping the dynamical organization of the cell nucleus through fluorescence correlation spectroscopy

Autores
Stortz, Martin Dario; Angiolini, Juan Francisco; Mocskos, Esteban Eduardo; Wolosiuk, Alejandro; Pecci, Adali; Levi, Valeria
Año de publicación
2017
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
The hierarchical organization of the cell nucleus into specialized open reservoirs and the nucleoplasm overcrowding impose restrictions to the mobility of biomolecules and their interactions with nuclear targets. These properties determine that many nuclear functions such as transcription, replication, splicing or DNA repair are regulated by complex, dynamical processes that do not follow simple rules. Advanced fluorescence microscopy tools and, in particular, fluorescence correlation spectroscopy (FCS) provide complementary and exquisite information on the dynamics of fluorescent labeled molecules moving through the nuclear space and are helping us to comprehend the complexity of the nuclear structure. Here, we describe how FCS methods can be applied to reveal the dynamical organization of the nucleus in live cells. Specifically, we provide instructions for the preparation of cellular samples with fluorescent tagged proteins and detail how FCS can be easily instrumented in commercial confocal microscopes. In addition, we describe general rules to set the parameters for one and two-color experiments and the required controls for these experiments. Finally, we review the statistical analysis of the FCS data and summarize the use of numerical simulations as a complementary approach that helps us to understand the complex matrix of molecular interactions network within the nucleus.
Fil: Stortz, Martin Dario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina
Fil: Angiolini, Juan Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Formación e Investigación en Enseñanza de las Ciencias; Argentina
Fil: Mocskos, Esteban Eduardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Computación; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Simulación Computacional para Aplicaciones Tecnológicas; Argentina
Fil: Wolosiuk, Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Inorgánica, Analítica y Química Física; Argentina
Fil: Pecci, Adali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina
Fil: Levi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina
Materia
Fluorescence Correlation Spectroscopy
Nucleus
Transcription Factor
Fernet
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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Finally, we review the statistical analysis of the FCS data and summarize the use of numerical simulations as a complementary approach that helps us to understand the complex matrix of molecular interactions network within the nucleus.Fil: Stortz, Martin Dario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Angiolini, Juan Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Formación e Investigación en Enseñanza de las Ciencias; ArgentinaFil: Mocskos, Esteban Eduardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Computación; Argentina. 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