Evaluación de la PCR en tiempo real dúplex (qPCR) con sondas TaqMan para la detección de la infección por Trypanosoma cruzi en muestras de sangre periférica congeladas anticoagulad...

Autores: Apodaca, Sofia; Besuschio, Susana Alicia; Muñoz Calderon, Arturo Alejandro; Garcia Zuñiga, Maria Alexandra; Longhi, Silvia Andrea; Schijman, Alejandro Gabriel
Año de publicación: 2020
Idioma: español castellano
Tipo de recurso: documento de conferencia
Estado: versión publicada
Descripción: La qPCR multiplex para detectar la infección por Trypanosoma cruzi, agente causal de la Enfermedad de Chagas (ECh), ha sido validada y estandarizada en estudios multicéntricos para el monitoreo del tratamiento anti-parasitario a partir de 5 o 10 mL de sangre periférica mezclada con un volumen igual de clorhidrato de guanidina 6 M / EDTA 0.2 M pH: 8.0. El objetivo de este trabajo fue realizar una validación analítica del método de qPCR a partir de muestras de sangre congeladas utilizando EDTA como anticoagulante (sangre-EDTA). El rango anticipado reportable y el límite de detección (LOD95) se estimaron utilizando sangre-EDTA no infectada inoculada con epimastigotes de la cepa CL-Brener (TcVI) en concentraciones de 0,1, 0,5 y 1 equivalentes parasitarios por mililitro (p.e/mL). Los datos fueron analizados por el criterio de Tukey para detectar valores atípicos del control de amplificación interno; el LOD se calculó con el software Probit MedCalc, obteniendo un valor de 0,27 (IC 95% [0,16-1,26]) p.e/mL. El método se utilizó en un muestreo de conveniencia para monitorear una serie de casos con ECh en distintas situaciones clínicas: 5 casos de reactivación de la infección en pacientes con ECh Crónica que recibieron un trasplante de órgano, 2 pacientes seronegativos que desarrollaron ECh Aguda luego de recibir un trasplante de órganos sólidos de donantes con ECh y un paciente con ECh y artritis reumatoidea bajo tratamiento inmunomodulador. En todos los casos, la qPCR con muestras de sangre-EDTA fue útil para monitorear y tomar decisiones sobre el tratamiento de los pacientes, ya sea con drogas anti-parasitarias o inmunomoduladoras, pudiendo incluso detectar la presencia de parásitos cuando el Strout aún permanecía negativo. La relevancia de analizar la infección por T. cruzi en muestras de sangre-EDTA radica en su disponibilidad comercial en diversos formatos y su uso actual en las instituciones de salud.
Fil: Apodaca, Sofia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Garcia Zuñiga, Maria Alexandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
XXXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Protozoología
Materia: Trypanosoma cruzi
Chagas
Molecular diagnostic
QPCR
Nivel de accesibilidad: acceso abierto
Condiciones de uso: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repositorio
Institución: Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identificador: oai:ri.conicet.gov.ar:11336/201600

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El rango anticipado reportable y el límite de detección (LOD95) se estimaron utilizando sangre-EDTA no infectada inoculada con epimastigotes de la cepa CL-Brener (TcVI) en concentraciones de 0,1, 0,5 y 1 equivalentes parasitarios por mililitro (p.e/mL). Los datos fueron analizados por el criterio de Tukey para detectar valores atípicos del control de amplificación interno; el LOD se calculó con el software Probit MedCalc, obteniendo un valor de 0,27 (IC 95% [0,16-1,26]) p.e/mL. El método se utilizó en un muestreo de conveniencia para monitorear una serie de casos con ECh en distintas situaciones clínicas: 5 casos de reactivación de la infección en pacientes con ECh Crónica que recibieron un trasplante de órgano, 2 pacientes seronegativos que desarrollaron ECh Aguda luego de recibir un trasplante de órganos sólidos de donantes con ECh y un paciente con ECh y artritis reumatoidea bajo tratamiento inmunomodulador. 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Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Garcia Zuñiga, Maria Alexandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaXXXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de ProtozoologíaSociedad Argentina de ProtozoologíaRiarte, Adelina RosaLonghi, Silvia AndreaFrank, Fernanda María2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectReuniónBookhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/201600Evaluación de la PCR en tiempo real dúplex (qPCR) con sondas TaqMan para la detección de la infección por Trypanosoma cruzi en muestras de sangre periférica congeladas anticoaguladas con EDTA; XXXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2020; 82-82CONICET DigitalCONICETspainfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://protozoologia.org.ar/wp-content/uploads/Libro-de-Resumenes-SAP-2020.pdfNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-10-15T14:26:22Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/201600instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-10-15 14:26:22.956CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
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