COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR
- Autores
- Tapia, Cinthya Mariela; Suares, Alejandra Carolina; Salvador, Gabriela Alejandra; González Pardo, María Verónica
- Año de publicación
- 2017
- Idioma
- inglés
- Tipo de recurso
- documento de conferencia
- Estado
- versión publicada
- Descripción
- The Kaposi's Sarcoma-associated Herpes virus G Protein-Coupled Receptor (vGPCR) is a key molecule in the pathogenesis of Kaposi Sarcoma. 1α,25(OH)2D3 anti-proliferative impact in vGPCR cells occur in part by NF-κB pathway negative modulation, family of conserved transcription factors critical during the inflammatory response. In this work, we studied if COX-2 modulation by 1alpha,25(OH)2D3 in vGPCR cells contributes to the anti-inflammatory action. As we have previously reported vGPCR cell proliferation is inhibited by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 48 h) due to a reduction on cell number. The blockage of arachidonic acid release by ATK (cPLA2 inhibitor) or the COX-2 inhibition (Celecoxib) decreased vGPCR cell number in a dose dependent manner (10-20 µM), similarly to 1alpha,25(OH)2D3. These changes were accompanied by morphological modifications observed at the microscope. qRT-PCR analysis of COX-2 gene expression revealed a mRNA increase within 20 min of 1alpha,25(OH)2D3 treatment and remains increased at least for 72 h. Moreover, ATK (20 µM) could not counteract COX-2 mRNA induced by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 24 h). Finally, COX-2 VDR dependence was evaluated using the stable VDR knock-down cell line vGPCR-shVDR where COX-2 mRNA rise by 1alpha,25(OH)2D3 was found impaired. Significant differences of the data between control (vehicle) and treated conditions were analyzed by one way-ANOVA followed by Bonferroni test (p< 0.05) or t-test (*p< 0.05, **p<0.01). All together, these results suggest that 1alpha,25(OH)2D3 enhances endothelial inflammation initiation through COX-2 upregulation and contributes to its timely resolution through the antineoplastic action. This shows a possible dual effect as both a promoter and attenuator of inflammation.
Fil: Tapia, Cinthya Mariela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina
Fil: Suares, Alejandra Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina
Fil: Salvador, Gabriela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina
Fil: González Pardo, María Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina
LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología
Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Sociedad Argentina de Inmunología
Sociedad Argentina de Farmacología Experimental
Sociedad Argentina de Protozoología
Asociación Argentina de Hematología
Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular
Sociedad Argentina de Andrología
Sociedad Argentina de Biofísica
Sociedad Argentina de Biología - Materia
-
COX-2
VGPCR CELLS
VITAMIN D
ANTINEOPLASTIC EFFECTS - Nivel de accesibilidad
- acceso abierto
- Condiciones de uso
- https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
- Repositorio
- Institución
- Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
- OAI Identificador
- oai:ri.conicet.gov.ar:11336/239566
Ver los metadatos del registro completo
id |
CONICETDig_74bdb5284138a3bbd64b62a6d21e9e7b |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/239566 |
network_acronym_str |
CONICETDig |
repository_id_str |
3498 |
network_name_str |
CONICET Digital (CONICET) |
spelling |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCRTapia, Cinthya MarielaSuares, Alejandra CarolinaSalvador, Gabriela AlejandraGonzález Pardo, María VerónicaCOX-2VGPCR CELLSVITAMIN DANTINEOPLASTIC EFFECTShttps://purl.org/becyt/ford/1.6https://purl.org/becyt/ford/1The Kaposi's Sarcoma-associated Herpes virus G Protein-Coupled Receptor (vGPCR) is a key molecule in the pathogenesis of Kaposi Sarcoma. 1α,25(OH)2D3 anti-proliferative impact in vGPCR cells occur in part by NF-κB pathway negative modulation, family of conserved transcription factors critical during the inflammatory response. In this work, we studied if COX-2 modulation by 1alpha,25(OH)2D3 in vGPCR cells contributes to the anti-inflammatory action. As we have previously reported vGPCR cell proliferation is inhibited by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 48 h) due to a reduction on cell number. The blockage of arachidonic acid release by ATK (cPLA2 inhibitor) or the COX-2 inhibition (Celecoxib) decreased vGPCR cell number in a dose dependent manner (10-20 µM), similarly to 1alpha,25(OH)2D3. These changes were accompanied by morphological modifications observed at the microscope. qRT-PCR analysis of COX-2 gene expression revealed a mRNA increase within 20 min of 1alpha,25(OH)2D3 treatment and remains increased at least for 72 h. Moreover, ATK (20 µM) could not counteract COX-2 mRNA induced by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 24 h). Finally, COX-2 VDR dependence was evaluated using the stable VDR knock-down cell line vGPCR-shVDR where COX-2 mRNA rise by 1alpha,25(OH)2D3 was found impaired. Significant differences of the data between control (vehicle) and treated conditions were analyzed by one way-ANOVA followed by Bonferroni test (p< 0.05) or t-test (*p< 0.05, **p<0.01). All together, these results suggest that 1alpha,25(OH)2D3 enhances endothelial inflammation initiation through COX-2 upregulation and contributes to its timely resolution through the antineoplastic action. This shows a possible dual effect as both a promoter and attenuator of inflammation.Fil: Tapia, Cinthya Mariela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Suares, Alejandra Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Salvador, Gabriela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: González Pardo, María Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaLXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaBuenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de ProtozoologíaAsociación Argentina de HematologíaSociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología MolecularSociedad Argentina de AndrologíaSociedad Argentina de BiofísicaSociedad Argentina de BiologíaFundación Revista Medicina2017info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectReuniónJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/239566COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR; LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Buenos Aires; Argentina; 2017; 1 - 6211669-9106CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.saic.org.ar/reuniones-anuales-previasNacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-29T10:40:55Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/239566instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-29 10:40:55.823CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse |
dc.title.none.fl_str_mv |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
title |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
spellingShingle |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR Tapia, Cinthya Mariela COX-2 VGPCR CELLS VITAMIN D ANTINEOPLASTIC EFFECTS |
title_short |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
title_full |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
title_fullStr |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
title_full_unstemmed |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
title_sort |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR |
dc.creator.none.fl_str_mv |
Tapia, Cinthya Mariela Suares, Alejandra Carolina Salvador, Gabriela Alejandra González Pardo, María Verónica |
author |
Tapia, Cinthya Mariela |
author_facet |
Tapia, Cinthya Mariela Suares, Alejandra Carolina Salvador, Gabriela Alejandra González Pardo, María Verónica |
author_role |
author |
author2 |
Suares, Alejandra Carolina Salvador, Gabriela Alejandra González Pardo, María Verónica |
author2_role |
author author author |
dc.subject.none.fl_str_mv |
COX-2 VGPCR CELLS VITAMIN D ANTINEOPLASTIC EFFECTS |
topic |
COX-2 VGPCR CELLS VITAMIN D ANTINEOPLASTIC EFFECTS |
purl_subject.fl_str_mv |
https://purl.org/becyt/ford/1.6 https://purl.org/becyt/ford/1 |
dc.description.none.fl_txt_mv |
The Kaposi's Sarcoma-associated Herpes virus G Protein-Coupled Receptor (vGPCR) is a key molecule in the pathogenesis of Kaposi Sarcoma. 1α,25(OH)2D3 anti-proliferative impact in vGPCR cells occur in part by NF-κB pathway negative modulation, family of conserved transcription factors critical during the inflammatory response. In this work, we studied if COX-2 modulation by 1alpha,25(OH)2D3 in vGPCR cells contributes to the anti-inflammatory action. As we have previously reported vGPCR cell proliferation is inhibited by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 48 h) due to a reduction on cell number. The blockage of arachidonic acid release by ATK (cPLA2 inhibitor) or the COX-2 inhibition (Celecoxib) decreased vGPCR cell number in a dose dependent manner (10-20 µM), similarly to 1alpha,25(OH)2D3. These changes were accompanied by morphological modifications observed at the microscope. qRT-PCR analysis of COX-2 gene expression revealed a mRNA increase within 20 min of 1alpha,25(OH)2D3 treatment and remains increased at least for 72 h. Moreover, ATK (20 µM) could not counteract COX-2 mRNA induced by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 24 h). Finally, COX-2 VDR dependence was evaluated using the stable VDR knock-down cell line vGPCR-shVDR where COX-2 mRNA rise by 1alpha,25(OH)2D3 was found impaired. Significant differences of the data between control (vehicle) and treated conditions were analyzed by one way-ANOVA followed by Bonferroni test (p< 0.05) or t-test (*p< 0.05, **p<0.01). All together, these results suggest that 1alpha,25(OH)2D3 enhances endothelial inflammation initiation through COX-2 upregulation and contributes to its timely resolution through the antineoplastic action. This shows a possible dual effect as both a promoter and attenuator of inflammation. Fil: Tapia, Cinthya Mariela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina Fil: Suares, Alejandra Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina Fil: Salvador, Gabriela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentina Fil: González Pardo, María Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología Buenos Aires Argentina Sociedad Argentina de Investigación Clínica Sociedad Argentina de Inmunología Sociedad Argentina de Farmacología Experimental Sociedad Argentina de Protozoología Asociación Argentina de Hematología Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular Sociedad Argentina de Andrología Sociedad Argentina de Biofísica Sociedad Argentina de Biología |
description |
The Kaposi's Sarcoma-associated Herpes virus G Protein-Coupled Receptor (vGPCR) is a key molecule in the pathogenesis of Kaposi Sarcoma. 1α,25(OH)2D3 anti-proliferative impact in vGPCR cells occur in part by NF-κB pathway negative modulation, family of conserved transcription factors critical during the inflammatory response. In this work, we studied if COX-2 modulation by 1alpha,25(OH)2D3 in vGPCR cells contributes to the anti-inflammatory action. As we have previously reported vGPCR cell proliferation is inhibited by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 48 h) due to a reduction on cell number. The blockage of arachidonic acid release by ATK (cPLA2 inhibitor) or the COX-2 inhibition (Celecoxib) decreased vGPCR cell number in a dose dependent manner (10-20 µM), similarly to 1alpha,25(OH)2D3. These changes were accompanied by morphological modifications observed at the microscope. qRT-PCR analysis of COX-2 gene expression revealed a mRNA increase within 20 min of 1alpha,25(OH)2D3 treatment and remains increased at least for 72 h. Moreover, ATK (20 µM) could not counteract COX-2 mRNA induced by 1alpha,25(OH)2D3 (10 nM, 24 h). Finally, COX-2 VDR dependence was evaluated using the stable VDR knock-down cell line vGPCR-shVDR where COX-2 mRNA rise by 1alpha,25(OH)2D3 was found impaired. Significant differences of the data between control (vehicle) and treated conditions were analyzed by one way-ANOVA followed by Bonferroni test (p< 0.05) or t-test (*p< 0.05, **p<0.01). All together, these results suggest that 1alpha,25(OH)2D3 enhances endothelial inflammation initiation through COX-2 upregulation and contributes to its timely resolution through the antineoplastic action. This shows a possible dual effect as both a promoter and attenuator of inflammation. |
publishDate |
2017 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2017 |
dc.type.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion info:eu-repo/semantics/conferenceObject Reunión Journal http://purl.org/coar/resource_type/c_5794 info:ar-repo/semantics/documentoDeConferencia |
status_str |
publishedVersion |
format |
conferenceObject |
dc.identifier.none.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/11336/239566 COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR; LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Buenos Aires; Argentina; 2017; 1 - 621 1669-9106 CONICET Digital CONICET |
url |
http://hdl.handle.net/11336/239566 |
identifier_str_mv |
COX-2 regulation by 1alpha,25(OH)2D3-VDR ligand in endothelial cells expressing vGPCR; LXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología y XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Buenos Aires; Argentina; 2017; 1 - 621 1669-9106 CONICET Digital CONICET |
dc.language.none.fl_str_mv |
eng |
language |
eng |
dc.relation.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.saic.org.ar/reuniones-anuales-previas |
dc.rights.none.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/ |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
rights_invalid_str_mv |
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/ |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf application/pdf application/pdf |
dc.coverage.none.fl_str_mv |
Nacional |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Fundación Revista Medicina |
publisher.none.fl_str_mv |
Fundación Revista Medicina |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:CONICET Digital (CONICET) instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas |
reponame_str |
CONICET Digital (CONICET) |
collection |
CONICET Digital (CONICET) |
instname_str |
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas |
repository.name.fl_str_mv |
CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas |
repository.mail.fl_str_mv |
dasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.ar |
_version_ |
1844614438625214464 |
score |
13.070432 |