High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae

Autores
Urtasun, Nicolás; Baieli, María Fernanda; Cascone, Osvaldo; Wolman, Federico Javier; Miranda, Maria Victoria
Año de publicación
2015
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
Wheat germ agglutinin (WGA) is a homodimeric lectin stabilized by non-covalent interactions. Each monomer of 171 residues, which has a complex structure with 16 disulfide bridges, determines two sites for the specific binding of N-acetyl-d-glucosamine and one for the specific binding of N-acetylneuraminic acid. Because of these folding requirements, the production of high yields of recombinant WGA is still not possible and its extraction from wheat germ is the only source for commercial purposes. This work reports for the first time the expression of WGA isolectin A (WGA A), using a baculovirus expression system in Sf9 cells and Rachiplusia nu larvae. High levels of recombinant WGA A were obtained in both cases, especially in R. nu, where yields reached 346.6 ± 88.5 μg/g of larvae. Also, an integrated purification method was developed based on aqueous two-phase separation coupled to affinity chromatography using chitosan mini-spheres. The recombinant WGA A was able to recognize ovoalbumin sugar moieties, cross-react with anti-WGA serum and agglutinate human red blood cells, and showed the same behavior as that of commercial WGA in SDS-PAGE and RP-HPLC analyses.
Fil: Urtasun, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina
Fil: Baieli, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Wolman, Federico Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Materia
Aqueous Two-Phase System
Baculovirus
Chitosan Mini-Spheres
Larvae
Wheat Germ Agglutinin
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identificador
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/37632
Acceder
id CONICETDig_2cc7dfdc48f212b0a9ef91da0de12ea0
oai_identifier_str oai:ri.conicet.gov.ar:11336/37632
network_acronym_str CONICETDig
repository_id_str 3498
network_name_str CONICET Digital (CONICET)
spelling High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvaeUrtasun, NicolásBaieli, María FernandaCascone, OsvaldoWolman, Federico JavierMiranda, Maria VictoriaAqueous Two-Phase SystemBaculovirusChitosan Mini-SpheresLarvaeWheat Germ Agglutininhttps://purl.org/becyt/ford/2.9https://purl.org/becyt/ford/2Wheat germ agglutinin (WGA) is a homodimeric lectin stabilized by non-covalent interactions. Each monomer of 171 residues, which has a complex structure with 16 disulfide bridges, determines two sites for the specific binding of N-acetyl-d-glucosamine and one for the specific binding of N-acetylneuraminic acid. Because of these folding requirements, the production of high yields of recombinant WGA is still not possible and its extraction from wheat germ is the only source for commercial purposes. This work reports for the first time the expression of WGA isolectin A (WGA A), using a baculovirus expression system in Sf9 cells and Rachiplusia nu larvae. High levels of recombinant WGA A were obtained in both cases, especially in R. nu, where yields reached 346.6 ± 88.5 μg/g of larvae. Also, an integrated purification method was developed based on aqueous two-phase separation coupled to affinity chromatography using chitosan mini-spheres. The recombinant WGA A was able to recognize ovoalbumin sugar moieties, cross-react with anti-WGA serum and agglutinate human red blood cells, and showed the same behavior as that of commercial WGA in SDS-PAGE and RP-HPLC analyses.Fil: Urtasun, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Baieli, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Wolman, Federico Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaElsevier2015-01info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501info:ar-repo/semantics/articuloapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/37632Urtasun, Nicolás; Baieli, María Fernanda; Cascone, Osvaldo; Wolman, Federico Javier; Miranda, Maria Victoria; High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae; Elsevier; Process Biochemistry; 50; 1; 1-2015; 40-471359-5113CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1359511314005509info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/10.1016/j.procbio.2014.11.004info:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-29T10:41:58Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/37632instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-29 10:41:58.291CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
dc.title.none.fl_str_mv High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
title High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
spellingShingle High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
Urtasun, Nicolás
Aqueous Two-Phase System
Baculovirus
Chitosan Mini-Spheres
Larvae
Wheat Germ Agglutinin
title_short High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
title_full High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
title_fullStr High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
title_full_unstemmed High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
title_sort High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae
dc.creator.none.fl_str_mv Urtasun, Nicolás
Baieli, María Fernanda
Cascone, Osvaldo
Wolman, Federico Javier
Miranda, Maria Victoria
author Urtasun, Nicolás
author_facet Urtasun, Nicolás
Baieli, María Fernanda
Cascone, Osvaldo
Wolman, Federico Javier
Miranda, Maria Victoria
author_role author
author2 Baieli, María Fernanda
Cascone, Osvaldo
Wolman, Federico Javier
Miranda, Maria Victoria
author2_role author
author
author
author
dc.subject.none.fl_str_mv Aqueous Two-Phase System
Baculovirus
Chitosan Mini-Spheres
Larvae
Wheat Germ Agglutinin
topic Aqueous Two-Phase System
Baculovirus
Chitosan Mini-Spheres
Larvae
Wheat Germ Agglutinin
purl_subject.fl_str_mv https://purl.org/becyt/ford/2.9
https://purl.org/becyt/ford/2
dc.description.none.fl_txt_mv Wheat germ agglutinin (WGA) is a homodimeric lectin stabilized by non-covalent interactions. Each monomer of 171 residues, which has a complex structure with 16 disulfide bridges, determines two sites for the specific binding of N-acetyl-d-glucosamine and one for the specific binding of N-acetylneuraminic acid. Because of these folding requirements, the production of high yields of recombinant WGA is still not possible and its extraction from wheat germ is the only source for commercial purposes. This work reports for the first time the expression of WGA isolectin A (WGA A), using a baculovirus expression system in Sf9 cells and Rachiplusia nu larvae. High levels of recombinant WGA A were obtained in both cases, especially in R. nu, where yields reached 346.6 ± 88.5 μg/g of larvae. Also, an integrated purification method was developed based on aqueous two-phase separation coupled to affinity chromatography using chitosan mini-spheres. The recombinant WGA A was able to recognize ovoalbumin sugar moieties, cross-react with anti-WGA serum and agglutinate human red blood cells, and showed the same behavior as that of commercial WGA in SDS-PAGE and RP-HPLC analyses.
Fil: Urtasun, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina
Fil: Baieli, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Wolman, Federico Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
description Wheat germ agglutinin (WGA) is a homodimeric lectin stabilized by non-covalent interactions. Each monomer of 171 residues, which has a complex structure with 16 disulfide bridges, determines two sites for the specific binding of N-acetyl-d-glucosamine and one for the specific binding of N-acetylneuraminic acid. Because of these folding requirements, the production of high yields of recombinant WGA is still not possible and its extraction from wheat germ is the only source for commercial purposes. This work reports for the first time the expression of WGA isolectin A (WGA A), using a baculovirus expression system in Sf9 cells and Rachiplusia nu larvae. High levels of recombinant WGA A were obtained in both cases, especially in R. nu, where yields reached 346.6 ± 88.5 μg/g of larvae. Also, an integrated purification method was developed based on aqueous two-phase separation coupled to affinity chromatography using chitosan mini-spheres. The recombinant WGA A was able to recognize ovoalbumin sugar moieties, cross-react with anti-WGA serum and agglutinate human red blood cells, and showed the same behavior as that of commercial WGA in SDS-PAGE and RP-HPLC analyses.
publishDate 2015
dc.date.none.fl_str_mv 2015-01
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/article
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
http://purl.org/coar/resource_type/c_6501
info:ar-repo/semantics/articulo
format article
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/11336/37632
Urtasun, Nicolás; Baieli, María Fernanda; Cascone, Osvaldo; Wolman, Federico Javier; Miranda, Maria Victoria; High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae; Elsevier; Process Biochemistry; 50; 1; 1-2015; 40-47
1359-5113
CONICET Digital
CONICET
url http://hdl.handle.net/11336/37632
identifier_str_mv Urtasun, Nicolás; Baieli, María Fernanda; Cascone, Osvaldo; Wolman, Federico Javier; Miranda, Maria Victoria; High-level expression and purification of recombinant wheat germ agglutinin in Rachiplusia nu larvae; Elsevier; Process Biochemistry; 50; 1; 1-2015; 40-47
1359-5113
CONICET Digital
CONICET
dc.language.none.fl_str_mv eng
language eng
dc.relation.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1359511314005509
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/10.1016/j.procbio.2014.11.004
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Elsevier
publisher.none.fl_str_mv Elsevier
dc.source.none.fl_str_mv reponame:CONICET Digital (CONICET)
instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
reponame_str CONICET Digital (CONICET)
collection CONICET Digital (CONICET)
instname_str Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.name.fl_str_mv CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.mail.fl_str_mv dasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.ar
_version_ 1844614451817349120
score 13.070432

Publicaciones similares