High-level expression and purification of recombinant horseradish peroxidase isozyme C in SF-9 insect cell culture

Autores
Segura, María De Las M.; Levin, Gustavo Javier; Miranda, María V.; Mendive, Fernando M.; Targovnik, Hector Manuel; Cascone, Osvaldo
Año de publicación
2005
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
A method to obtain high-expression levels of recombinant horseradish peroxidase isozyme C (HRP C) in Spodoptera frugiperda Sf-9 cell culture and a strategy for its purification are described. HRP C was secreted into the culture medium where it accumulated to 25.6 mg/l. Addition of hemin to the insect cell culture increased the level of active enzyme expression up to 41.3 mg/l. A selective staining procedure using 3,3′-diaminobenzidine allowed visualisation of HRP C in the infected insect cells and provided an alternative staining strategy for titration of recombinant baculovirus carrying the HRP gene. Immobilised metal ion affinity chromatography using a Ni-NTA matrix with elution in the gradient-step mode yielded a 68% HRP C recovery with a RZ of 2.8. When the displacement elution mode was utilised, the yield was essentially the same and the product was electrophoretically pure, having a RZ of 3.2.
Fil: Segura, María De Las M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Levin, Gustavo Javier. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Miranda, María V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina
Fil: Mendive, Fernando M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Targovnik, Hector Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Genética y Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina
Fil: Cascone, Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Materia
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IMAC
INSECT CELL
PEROXIDASE ISOZYME C
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SPODOPTERA FRUGIPERDA SF-9
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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