Diagnóstico de paludismo por Plasmodium Vivax utilizando secuencias repetitivas de ADN parasitario

• Autores: Carnevale, Silvana
• Año de publicación: 2002
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Angel, Sergio Oscar
• Materia: PALUDISMO; PLASMODIUM VIVAX; DIAGNOSTICO; VIGILANCIA; CONTROL DE VECTORES; MANEJO CLINICO; SECUENCIAS DE ADN REPETITIVAS; MALARIA; PLAMODIUM VIVAX; DIAGNOSIS; SURVEILLANCE; VECTOR CONTROL; CLINICAL MANAGEMENT; REPETITIVE SEQUENCES OF DNA
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La malaria es un problema de salud pública mundial en más de 100 paises habitados porun total de 2.400 millones de personas, representando el 40% de la población mundial. Lascuatro especies más comunes que infectan al hombre son: Plasmodium vivax, P. falciparum, P.malariae y P. ovale, de las cuales, las dos primeras, representan el 95% de las infecciones. En Argentina se plantea la necesidad de trabajar sobre P. vivax, pues no se han registrado casosautóctonos de paludismo por P. falciparum. El propósito de este estudio fue disponer de herramientas moleculares para la detecciónde P. vivax, aplicables a muestras humanas y vectores, adaptables a las condiciones derecolección y procesamiento básico disponibles en las bases operativas del Programa Nacionalde Paludismo. Para ello se obtuvieron y caracterizaron secuencias repetitivas de ADN de P.vivax. El fragmento clonado (instPv10) resultó en un tamaño de 6.899 pb y presentó variasrepeticiones directas en tandem y un elemento repetitivo del tipo disperso. Este fragmentoincluyó la secuencia específica de P. vivax, insPv10-ll, de 75 pb, que fue empleada comosonda en el desarrollo de la técnica de Dot blot, y la secuencia insPvE/C, dentro de la cual sediseñó el blanco de reacción de PCR. Desde el punto de vista del diagnóstico individual, las técnicas de PCR-sangre einsPv10-11-Dot blot demostraron ser valiosas para emplearse como métodos en el diagnósticode pacientes sintomáticos y asintomáticos, incluyendo aquellos que retoman de una zonaendémica de infecciones causadas por P. vivax, y para el seguimiento de pacientes. Desde la perspectiva epidemiológica la técnica de PCR-elutorios desarrollada en estetrabajo permitió efectuar el diagnóstico específico de la especie P. vivax en pacientessintomáticos y asintomáticos, lo que facilitaría su uso en acciones de detección por búsquedapasiva y activa. Por otro lado, el método de PCR aplicado a vectores mostró ser una de laspocas alternativas disponibles de alta sensibilidad y especificidad para la detección de P. vivaxen mosquitos experimental y naturalmente infectados, con condiciones prácticas deconservación de muestras. Las técnicas desarrolladas en este trabajo son de utilidad para elmanejo de brotes y epidemias ya contribuyen a la detección del aumento de la tasa de infecciónen mosquitos, al estudio de las migraciones y la vigilancia de la quimiorresistencia. El trabajorealizado se enmarca como un desarrollo local de herramientas diagnósticas aplicables alcontrol del paludismo en Argentina.
Malaria is a public health problem in more than one hundred countries, meaning that 40% (2,400 million) of the world’s total population is exposed to malaria risk. The fourcommon species that infect humans are Plasmodium vivax, P. falciparum, P. malariae y P.ovale, and the two first ones represent 95% of infections. In Argentina it is necessary to workon P. vivax, because there are not local cases of malaria due to P. falciparum. The purpose of this study was to have disposal of molecular tools for the detection of P.vivax, that could be applied to human and mosquito samples, and adapted to the basicconditions of collection and processing available at the operating settings of the National Malaria Programme. In this way we obtained and characterized repetitive sequences of P. vivax DNA. The cloned fragment (insPv10) resulted in a molecular size of 6,899 bp, with severaltandem direct repeats and a repetitive interspersed element. This fragment included theinsPv10-ll P. vivax-specific sequence (75 bp), employed as probe for the development of the Dot blot technique, and the insPvE/C sequence, inside which the PCR target was designed. At the individual level, the PCR-blood and insPv10-11-Dot blot demonstrated to bevaluable methods for the diagnosis of symptomatic and asymptomatic patients, including thosereturning from P. vivax endemic areas, and for management of cases. At the epidemiological level, the technique of PCR-blood impregnated filter paper disksdeveloped in this work allowed the specific diagnosis of P. vivax in symptomatic andasymptomatic patients. This fact could facilitate its use in active and passive surveillance. The PCR methodology applied to malaria vectors showed to be one of the few available alternativesof high sensitivity and specificity for the detection of P. vivax in experimentally and naturallyinfected mosquitoes, with practical conditions for sample storage. The techniques developed inthis work are useful for management of outbreaks and epidemics, as they contribute to thedetection of increased infection ratios in mosquitoes, to the study of migrations, and to thesurveillance of drug resistance. This work can be described as a local development ofdiagnostic tools that can be applied to malaria control in Argentina.
Fil: Carnevale, Silvana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.