Interacción temprana entre cepas de Salmonella enterica y el epitelio intestinal murino

• Autores: Giacomodonato, Mónica Nancy
• Año de publicación: 2005
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Cerquetti, María Cristina
• Materia: SALMONELLA ENTERICA; OXIDO NITRICO; MUTANTES DAM; MUTANTES TERMOSENSIBLES; SISTEMA DE SECRECION TIPO TRES; EPITELIO INTESTINAL; MODELO MURINO; NITRIC OXIDE; DAM MUTANTS; TEMPERATURE-SENSITIVE MUTANTS; TYPE THREE SECRETION SYSTEM; INTESTINAL EPITHELIUM
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Durante la infección por ciertos patógenos entéricos como Salmonella spp. las células de la mucosa intestinal regulan positivamente la expresión de genes cuyos productos activan tanto la respuesta inflamatoria como inmune alterando las funciones del epitelio. El resultado de esta interacción temprana “huéspedbacteria” determinaría el posterior establecimiento de la infección o la inducción de una respuesta inmune protectiva. Los estudios realizados con las mutantes termosensibles de Salmonella Enteritidis con diferente capacidad protectiva permitieron demostrar la participación del óxido nítrico en los estadios tempranos de la respuesta inmune. Se encontró que la mutante protectiva E/1/3 induce la enzima iNOS intestinal luego de la inoculación en el modelo murino. Más aún la inhibición de la iNOS en el momento de la inmunización abolió completamente la capacidad protectiva de dicha mutante. Estos resultados sugieren que el óxido nítrico actúa como nexo entre la inmunidad innata y adaptativa. El modelo murino de salmonelosis permitió caracterizar a la mutante SD1 de Salmonella Enteritidis cuya proteína Dam carece de los últimos 10 aminoácidos. Se encontró que dicha mutante es altamente atenuada e induce inmunidad protectiva en ratones. La combinación de la atenuación y la habilidad de colonizar órganos internos hace de la mutante SD1 una excelente candidata como cepa vacuna/vector. Resulta claro, a la luz de recientes investigaciones, que una de las características que debiera conservarse en las cepas vacuna/vector de Salmonella spp. es la integridad del sistema de secreción tipo tres. En este trabajo se desarrolló un modelo experimental que permite el análisis cuantitativo de la expresión y secreción de las proteínas efectoras de Salmonella Typhimurium in vivo. Nuestros resultados sugieren que los efectores dependientes de la SPI-1 pueden actuar en la célula huésped en eventos tardíos luego de la invasión en la infección sistémica murina. Futuras investigaciones son necesarias para confirmar la existencia de una complementación entre las acciones de los efectores de la SPI-1 y la SPI-2.
Certain enteric pathogens such as Salmonella spp. upregulate the expression of genes coding for molecules that activate inflammatory and immune response, this alters the epithelial functions. Interactions between the host and the pathogen can result in the establishment of the infection or the onset of a protective immune response. The use of temperature sensitive mutants of Salmonella Enteritidis bearing different protective capabilities allowed us to demonstrate that nitric oxide participates in the early stages of the immune response. Protective mutant E/1/3 induces intestinal iNOS in mice upon inoculation. Moreover, when iNOS activity was inhibited at the time of immunization the protective capacity of mutant E/1/3 was completely abolished. These results suggest that nitric oxide could be the link between innate and adaptative immunity Salmonella Enteritidis SD1 mutant, lacking the last 10 aminoacids from the Dam protein, was characterized using the murine model for salmonellosis. The mutant is highly attenuated and induces protective immunity in mice. The fact that this mutant is able to reach deep organs after inoculation, plus it’s significant avirulence, make SD1 a good candidate for a Salmonella spp. carrier vaccine. An important issue to have in mind when considering carrier vaccines, is the integrity of their type three secretion system (TTSS). In this work we developed an experimental model to quantify the expression and secretion of effector proteins of Salmonella Typhimurium in vivo. Our results indicate that SPI-1 effector proteins may participate inside the eukaryotic cell during the late stages of murine systemic infection. Further studies are needed to confirm interactions between SPI-1 and SPI-2 effectors.
Fil: Giacomodonato, Mónica Nancy. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.