Transformación genética de girasol (Helianthus annuus L.)

• Autores: Lewi, Dalia Marcela
• Año de publicación: 2004
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Hopp, Horacio Esteban; Escandón, Alejandro S.
• Materia: AGROBACTERIUM TUMEFACIENCS; HELIANTHUS ANNUUS L.; PLANTAS TRANSGENICAS; TRANSFORMACION DE MERISTEMAS; TRANSFORMACION DE GIRASOL; AGROBACTERIUM TUMEFACIENS; HELIANTHUS ANNUUS L.; TRANSGENIC PLANTS; MERISTEM TRANSFORMATION; SUNFLOWER TRANSFORMATION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El girasol (Helianthus annuus L.) es una de las especies con mayor dificultad para ser transformada genéticamente debido a que es difícil combinar la transformación y la regeneración en el mismo tipo de células (Potrykus,1990). Se han reportado numerosas variantes en cuanto a la transformación de meristemas derivados de embriones maduros de girasol en función de desarrollar un protocolo de transformación de mayor eficiencia y que pueda ser aplicado de rutina en ensayos con genes de interés. En el presente trabajo se ha estudiado la respuesta de diversos explantos para la transformación y regeneración y se ha logrado obtener plantas transgénicas a partir de diversos genotipos, concentrando la atención en el tratamiento de meristemas divididos del genotipo HA89. Se ajustaron las condiciones de agroinfección en cocultivo líquido para las cepas EHA 105 y C58, obteniendo una eficiencia de transformación (medida como plantas PCR positivas obtenidas en relación al número inicial de explantos tratados) de valores variables entre ensayos con promedios de 3.4% y 1.3% (para EHA105 y C58 respectivamente) y 5.23% para C58 conteniendo el plásmido 2x35SBtk. Se ha demostrado que el sistema propuesto es factible de aplicación con diversas cepas de Agrobacterium y plásmidos conteniendo distintos genes (tanto reporteros como de interés agronómico). También se ha estudiado la factibilidad de realizar ensayos a gran escala con el protocolo propuesto sin detrimento de la eficiencia de transformación.
Sunflower (Helianthus annuus L.) is considered one of the recalcitrant species in terms of transformation and regeneration. A routine transformation system of this crop requires cell cultures competent for efficient plant regeneration as well as an effective method for gene delivery. Numerous attempts have been made to introduce foreign genetic material into sunflower. In this work the performance of some explants (cotyledons, hypocotyls, leafs, meristems) under regeneration and transformation conditions are described. A transformation system was developed using Agrobacterium tumefaciens and split embryonic axis explants of Ha89 genotype in liquid culture with the strains EHA105 and C58. Mean transformation efficiency (PCR+ plants/treated explants) varied between experiments: 3.4% and 1.3% , for EHA105 and C58 respectively and 5.23% for C58 containing p2x35SBtk plasmid. The developed system has applicability to several Agrobacterium strains and plasmids with both reporter o agronomic interest genes. Transformation system scaling up was studied too, without loss of transformation efficiency.
Fil: Lewi, Dalia Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.