Caracterización de genes codificantes de glicosidasas de pared celular relacionadas al crecimiento y a la maduración de prunoideas

• Autores: Di Santo, Mariana Carolina
• Año de publicación: 2011
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Sozzi, Gabriel Oscar; Pagano, Eduardo Antonio
• Materia: ALFA-L-ARABINOFURANOSIDASA; SS-D-XILOSIDASA; PRUNUS PERSICA; PRUNUS SALICINA; MADURACION; ABLANDAMIENTO; ETILENO; EXPRESION GENICA; SPLICING; ALFA-L-ARABINOFURANOSIDASE; SS-D-OXYLOSIDASE; PRUNUS PERSICA; PRUNUS SALICINA; RIPENING; SOFTENING; ETHYLENE; GENE EXPRESSION; SPLICING
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La arabinosa es el prinicipal azúcar neutro no celulósico de la pared celular de durazno (Prunus persica (L.) Batsch) y de ciruela japonesa (Prunus salicina Lindl), observándose una pérdida neta de arabinosa tanto durante la maduración y el ablandamiento como en etapas previas a dicho proceso. Las α-L-arabinofuranosidasas y α-L-arabinofuranosidasas/β-D-xilosidasas son enzimas responsables de estas modificaciones en la pared celular de Prunus persica (L.) Batsch y de Prunus salicina Lindl. Se obtuvieron clones completos de ADNc desconocidos de durazno (PpARF1) y de ciruela japonesa (PsARF/XYL). Además, el gen PsARF/XYL fue clonado y secuenciado. PsARF/XYL presentó dos variantes de ARNm maduro, uno completamente spliceado y otro con un intrón terminal retenido, probablemente debido a splicing alternativo. La proteína deducida a partir de este último, resulta en un péptido truncado en su porción carboxi-terminal que podría alterar su funcionalidad pero que no implica la pérdida de los aminoácidos del sitio activo. También se obtuvieron secuencias parciales de un gen de ciruelo japonés denominado PsARF1 (por su homología con PpARF1) el cual fue incluido en los análisis de expresión génica. Reacciones de RT-PCR para el gen PsARF/XYL en distintas fases de la ontogenia y maduración del fruto reveló una expresión diferencial de los dos transcriptos alternativamente spliceados. Aunque PsARF1 se expresa durante el climaterio, se inhibe fuertemente ante tratamientos con etileno. En todos los casos analizados, los transcriptos se detectaron en otros tejidos de la planta, tanto vegetativos como reproductivos. Los resultados sugieren fuertemente que la expresión de estos genes de pared celular se encuentra regulada a nivel transcripcional y post-transcripcional en distintos tejidos y estados de desarrollo y que el etileno, hormona de la maduración en frutos climatéricos, podría participar en esa regulación.
Arabinose es the major non-cellulosic neutral sugar in the peach (Prunus persica (L.) Batsch) and japanese plum (Prunus salicina Lindl) cell wall and a net loss of arabinose residues accurs during ripening and softening and even in stages prior to this process. The α-L-arabinofuranosidases and α-L-arabinofuranosidase/β-D-xylosidases are enzymes responsible for these changes in the cell wall. In this work we characterized genes encoding cell wall glycosidases of Prunus persica (L.) Batsch and Prunus salicina Lindl. We obtained unknown full cDNA clones of peach (PpARF1) and Japanese plum (PsARF1/XYL). In addition, the gene PsARF/XYL was cloned and sequenced. PsARF/XYL presented two variants of the mRNA, a completely spliced and another terminal intron retained probably due to alternative splicing. The protein deduced from the latter, resulting in a truncated peptide at its carboxy-terminal portion tha could affect their functionality but that does not involve the loss of active site amino acids. Partial sequences of a gene called PsARF1 of Japanese plum (given its homology with PpARF1) were also obtained, which was included in the analysis of gene expression. PpARF1 expression was detected in mesocarp throughout development and ripening stages showed a differential expression of two alternatively spliced transcripts. Although PsARF1 is expressed during the climateric stage, it is strongly inhibited when ethylene treatment is applied. In all cases analyzed , transcripts were detected in other vegetative and reproductive tissues. The expression of both PsARF/XYL transcripts was detected in flower organs, roots and leaves. Results strongly suggest that the expression of these cell wall genes is regulated at the transcriptional and postranscriptional level in different tissues and developmental stages and that ethylene, the ripening hormone in climateric fruit, could be involved in the regulation of these enzymes.
Fil: Di Santo, Mariana Carolina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.