Estudio de la expresión de las dos UDP-GLC : glicoproteína glucosiltransferasas codificadas en el genoma de C. elegans

• Autores: Arango Restrepo, Olga Marcela
• Año de publicación: 2008
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Castro, Olga Alejandra
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El plegado de proteínas en una célula viva es un proceso complejo, con alta probabilidad de seguir caminos equivocados. Existen mecanismos destinados a asegurar que las proteínas alcancen una estructura espacial funcional y forman parte del control de calidad de plegamiento de glicoproteínas. Una estrategia es el agregado de la estructura Glc3MangGlcNAc2a residuos de asparagina. En el proceso de plegamiento el glicano interacciona con Iectinas chaperonas presentes en el retículo endoplasmático (RE), se eliminan las tres glucosas y la proteína plegada sigue su camino hacia el Golgi. La UDP-Glc: glicoproteína glucosiltransferasa (GT) participa en dicho mecanismo ya que se comporta como sensor de la conformación de glicoproteínas y glucosila sólo moléculas que no estén en su conformación nativa, de este modo la interacción de glicoproteínas monoglucosiladas con las chaperonas calnexina y calreticulina presentes en RE facilita el legamiento ya que previene su agregación y suprime la formación de uniones disulfuro no nativas. Si el plegamiento resulta defectuoso en forma permanente las glicoproteínas son inicialmente retenidas en el RE y posteriormente transportadas al citosol, donde son degradadas proteolíticamente en los proteosomas. En humanos, se identificaron dos genes (HUGTl y HUGTZ) cuyas secuencias presentan una alta homología con las secuencias de los genes que codifican las GT de diferentes organismos. Las proteínas codificadas por HUGT1y HUGT2 presentan un alto grado de identidad. Sin embargo, solo la proteína codificada por el gen HUGTl presenta actividad de GT. La proteína codificada por el gen HUGT2 carece de actividad de GT y no se conoce su actividad bioquímica ni tampoco cual es su papel fisiológico. En C. elegans se han identificado dos genes (F48E3.3 y F26H9.8) que presentan un alto grado de homología con las GT de diferentes organismos y las proteínas codificadas por ambos genes presentan un alto grado de identidad, en forma análoga a lo que ocurre en humanos. El objetivo fundamental de esta tesis consistió en estudiar: a) la expresión de las dos UDP-Glc:g|icoproteínas glucosiltransferasas codificadas en el genoma de C. elegans y b) La participación de ambos genes en el control de calidad de gilcoproteínas. Para ello se utilizó el sistema de de ARN de interferencia para eliminar la expresión de dichas proteínas en el gusano. A partir de ello se realizaron distintas observaciones. Una de ellas fue la sobrevida de los gusanos. Se vio que la falta de expresión de una u otra proteína muestra disminución en la expectativa de vida del gusano y provoca la muerte prematura. También se cuantificó el número de huevos puestos por gusano por día y se realizaron observaciones de los mismos al microscopio. Se constató la disminución en la puesta de huevos y algunos fenotipos en los grupos de gusanos transformados con los target de los genes F48E3.3 y F26H9.8. Se hicieron experimentos que miden el envejecimiento ocasionados por la depleción de nuestras proteínas del gusano como a) body bends o movimientos del cuerpo del gusano, donde se notó una disminución en la capacidad motora del nematodo, lo que nos sugiere que la falta de las proteínas para las cuales sus genes han sido silenciados produciría una alteración en el ciclo celular. B) autofluorescencia, del gusano donde se evidenció la acumulación de lipofusina en faringe e intestino principalmente en el grupo de gusanos GT2. Estos resultados indicarían que ambas proteínas se expresan en C.e/egans y que juegan un papel relevante durante el desarrollo ya que la depleción de las mismas producen alteraciones morfológicas y funcionales muy importantes, Por otro lado, los resultados obtenidos indicarían que probablemente la proteína codificada por el gen F48E3.3 posea actividad de GT ya que la depleción de la misma induce la expresión de marcadores de estrés de retículo. Los resultados obtenidos en esta tesina fueron parte de la siguiente presentación: Depletion of bother GTs Causes severe defectes n C.e/egans development Buzzi, L 1; Arango, O 1; Parodi, A 1; Castro O. 1,2.1 Fundación Instituto Leloir. Patricias Argentinas 435 Bs As, Argentina. 2 Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular, XVI Congreso de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular SAIB, Villa Carlos Paz,8—11 de noviembre 2008
Fil: Arango Restrepo, Olga Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.