Caracterización de una familia de acil-CoA tioesterasas en la regulación hormonal de la esteroidogénesis. Rol de la acil-CoA tioesterasa mitocondrial I

• Autores: Maloberti, Paula Mariana
• Año de publicación: 2004
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Podestá, Ernesto J.
• Materia: ACIDO ARAQUIDONICO; ACIL-COA TIOESTERASA; ESTEROIDOGENESIS; ACIL-COA SINTETASA; ARACHIDONIC ACID; ACYL-COA THIOESTERASE; STEROIDOGENESIS; ACYL-COA SYNTHETASE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Trabajos previos de nuestro laboratorio permitieron la purificación y clonado de una acil-CoA tioesterasa mitocondrial (MTE-1). Esta proteína pertenece a una nueva familia de acil-CoA tioesterasa con afinidad por ácidos grasos de cadena larga. Estos trabajos permitieron postular la existencia de un nuevo camino metabólico de liberación de ácido araquidónico (AA) con laintervención obligatoria de MTE-1 en la regulación hormonal de la esteroidogénesis. En la presente tesis se demuestra el papel obligatorio de esta enzima y se describe el mecanismo coordinado de una acil-CoA sintetasa 4 (ACS4) y MTE-1 en la liberaciónde ácido araquidónico y esteroidogénesis. Los principales resultados de este trabajo son: -La proteína recombinante purificada liberó AA a partir de araquidonoil-CoA y esta actividad fue afectada por inhibidores dela liberación de AA. -La actividad de acil-CoA tioesterasas mitocondriales de células esteroidogénicas se incrementó significativamente por estimulación hormonal. -Inhibidores de MTE-1 y ACS4 inhiben la esteroidogénesis inducida hormonalmente. Estos inhibidores en concentraciones inefectivas produjeron un efecto sinérgico sobre la inhibición de la esteroidogénesis cuando se utilizaron en forma conjunta. -Por último el papel obligatorio de ambas enzimas fue demostrado por la inhibición de la expresión las mismas utilizandola metodología de ADN copia antisentido y ARN de interferencia. El efecto inhibitorio producido sobre la esteroidogénesis por este tratamiento fue revertido por adición AA exógeno. Estos resultados comprueban el rol obligatorio de ambas enzimas en la regulación hormonal de la iberación AA y la esteroidogénesis, demostrando la presencia de un nuevo camino de liberación AA.
We have previously reported the purification and cloning of a mitochondrialacyl-CoA thioesterase (MTE-1). This protein is member of a new acyl-CoAthioesterase family that displays a high affinity for long chain fattyacids. The purification and characterization of MTE-1 allowed us to postulatethe existence of a new pathway of arachidonic acid release and a possiblerole of MTE-1 on the hormonal regulation of steroidogenesis. In the presentstudy we demonstrate the obligatory role played by MTE-1 in the steroid-producing pathway and we describe the coordinate action of an acyl-CoA synthetase (ACS4) and MTE-1 in the regulation of steroidogenesisand AA release. The main results in the present work are: -Purified recombinant MTE-1 released AA from arachidonoyl-CoA and itsactivity was inhibited by inhibitors of AA release. -The activity of endogenous MTE-1 was significantly increased in hormone-stimulated cells. -Hormone-stimulated steroid synthesis was significantly reduced byinhibitors of MTE-1 and ACS4 activity. The inhibitors produced asynergistic effect even when non-effective concentrations were usedin combination. -The obligatory role of MTE-1 and ACS4 was demonstrated by knocking downthe expression of both enzymes by using antisense or RNA interference approaches. The inhibitory effect observed on stimulated steroidogenesiswas reverted by the addition of exogenous AA. In summary, our results demonstrate the obligatory role of both MTE-1and ACS4 in the hormonal regulation of AA release and steroidogenesis,as a new mechanism of AA release different from the classical phospholipase A2-mediated pathway.
Fil: Maloberti, Paula Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.