Estudios sobre la transformación enzimática del ácido delta-amino levúlico en porfobilinógeno : Aislamiento, purificación y propiedades de la enzima delta-amino levúlico dehidrasa...

• Autores: Ferramola, Ana María
• Año de publicación: 1972
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Grinstein, Moisés; Mitta, Aldo E. A.
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Se describe un método para la síntesis química del ALA 4 14C. Se hace un estudio detallado sobre el aislamiento, purificación y propiedades de la enzima "Delta aminolevúlico dehidrasa". Se logró purificar la delta amino levúlico dehidrasa aislada de hígado vacuno unas 310 veces, resultando ser una enzima soluble. Es una enzima sulfhidrílica, cuya actividad es dependiente de la activación de grupos SH, con agentes tiol reductores, especialmente cuando se la purifica y estrictamente anaeróbico aún en las primeras etapas de su purificación. Presenta un pH óptimo a 6,8 en buffer de fosfato de potasio 0,067 M como en buffer Tris-ClH 0,05 M, aunque en este último buffer, la enzima es 30% menos activo. Es estable al calor y tiene una temperatura óptima de acción a 65°C, habiéndose determinado una energía de activación de 10.600 cal/mol. La formación de PBG resulta función lineal de la concentración de delta aminolevúlico dehidrasa, y del tiempo. Se determinó un PM de 140.000 ± 14.000 por el método de tamices moleculares, obteniéndose además evidencias que sugieren la existencia de subunidades de peso molecular 70.000 ± 7.000. Por electroforesis en gel de poliacrilamida y en gel de almidón a distintos pH, así como por ultracentrifugación se comportó como una única entidad proteica; determinándose un pI = 4,9. Tanto para la enzima previamente activada con cisteína, como para una preparación sin activar, se determinó sólo un grupo -SH funcional catalíticamente en cambio se titularon 3 grupos SH en presencia de urea 8 M. Por estudios comparativos con la delta amino levúlico dehidrasa purificada de callos de semilla de soya se ha propuesto un modelo estructural para ambas enzimas, con respecto a la distribución de los grupos -SH, en base a unidades de PM 140.000. En buffer Tris ClH la enzima presentó una curva de saturación sigmoidea con una [S0,5] = 3 x 10^(-4) M y un "n" de Hill igual 2,2, sin embargo en buffer de fosfato de potasio, el perfil cinético fué Michaeliano con un Km de 1,5 x 10^(-4) M. Se considera el ión fosfato, un efector heterotrópico positivo de la enzima. De los iones estudiados, sólo el Zn(++) produjo una ligera activación. No se determinó requerimiento de metales en especial, aunque la enzima fué inhibida por distintos agentes quelantes. Las bases púricas y nucleótidos de adenina a 10^(-2) M inhibieron marcadamente la actividad de la enzima. La delta amino levúlico dehidrasa de hígado vacuno fué inhibida por bajas concentraciones de Protoporfirina y Hemina. En base a esta inhibición, por producto final, al hecho de que esta enzima se encuentra ubicada en el punto de divergencia en la utilización del ALA, a que cataliza la síntesis del primer intermediario pirrólico exclusivamente utilizado en la biosíntesis de porfirinas a que en ciertas condiciones se comporta cinéticamente como una enzima alostérica, la delta levúlico dehidrasa en hígado vacuno estaría también involucrada en la regulación de la biosíntesis del Hemo en este tejido.
Fil: Ferramola, Ana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.