Regulación de la sobrevida de los linfocitos B de Leucemia Linfática Crónica : papel de los receptores para el fragmento Fc de la IgG

• Autores: Gamberale, Romina
• Año de publicación: 2002
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Giordano, Mirta; Geffner, Jorge R.
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La leucemia linfática crónica de células B (LLC-B) se caracteriza por laprogresiva acumulación de linfocitos B clonales, que presentan muy baja tasaproliferativa y resistencia a morir por apoptosis. El objetivo de este trabajo de Tesis fue investigar el papel que cumplen los leucocitos no-malignos comoposibles reguladores de la apoptosis de las células leucémicas. Por otro lado,considerando que las células LLC-B expresan receptores para el fragmento Fc dela IgG (RFCγ)y que es frecuente la presencia de complejos inmunes (Cl) en elsuero de los pacientes, se analizó el papel de los RFcγ en la modulación de lasobrevida de las células leucémicas. Los resultados obtenidos demuestran que los monocitos y las células NKson capaces de prolongar la sobrevida de las células leucémicas en cultivo através de distintos factores, tanto solubles como de contacto celular. Para tratarde identificar la producción de alguno de ellos se realizaron cultivos en presenciade anticuerpos neutralizantes anti-IFNγ,anti-IL-4 y anti-IL-10, encontrándose unamarcada heterogeneidad entre los distintos pacientes evaluados. La mismavariabilidad de respuesta se obtuvo al bloquear la interacción de CD40 con suligando mediante anticuerpos anti-CD40. En conjunto, estos resultados sugierenque la capacidad de los monocitos y las células NK de favorecer la sobrevida delas células leucémicas depende de una sumatoria de señales que parecen serparticulares de cada paciente. Cuando los cultivos de células LLC-B y leucocitos accesorios se llevaron acabo en presencia de Cl fue posible no sólo inhibir la apoptosis espontánea sinotambién la inducida agentes quimioterápicos como la fludarabina, el clorambuciloy la dexametasona. Es decir, que la activación de monocitos y células NK porentrecruzamiento de sus RFCγ estaría favoreciendo la acumulación del clonleucémico. Teniendo en cuenta que las células LLC-B sobre expresan la proteína antiapoptótica Bcl-2 y que la expresión de la misma se inhibe a medida que progresala apoptosis ¡n vitro, se examinaron los niveles de Bcl-2 en las células leucémicascultivadas con o sin leucocitos accesorios. Los resultados indican que lapresencia de monocitos y células NK retarda la down-regulación de Bol-2 en lascélulas leucémicas. Por el contrario, cuando la inhibición de la apoptosis de lascélulas LLC-B se da a consecuencia de la activación de los leucocitos accesoriospor Cl , el bol-2 no parece estar involucrado. La última parte de esta Tesis comprende el estudio de la expresión yfuncionalidad de los RFcγ expresados por las leucémicas. Los datos presentadosdemuestran que las células B-CLL expresan no sólo el RFcγIIb característico delas linfocitos B normales, sino también la isoforma RFcγIIa. Debido a que portandominios ITAM en su porción citoplasmática. los RFCγIIa transducen señales deactivación. Sin embargo, ni la utilización de distintos tipos de Cl, ni elentrecruzamiento selectivo de los RFCγIIa logró inducir la activación de las células LLC-B, medida como cambios en los flujos de calcio. Tampoco fue posiblemodular la apoptosis en las Leucémicas purificadas, Lo que sugiere que estereceptor no seria funcional en LLC-B.
B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) is characterized by theprogressive accumulation of clonal B lymphocytes caused by defects inprogrammed cell death rather than increased proliferation. The aim of the current Thesis was to investigate the role of non-malignant leucocytes in the regulation of B-CLLcells apoptosis. On the other hand, considering that leukemic cells expressreceptors for the Fc fragment of IgG (FCγR) and the presence of immunecomplexes (IC) is frequently found in B-CLL patients, we analized whether ICcould modulate leukemic cells survival. Our results show that monocytes and NK cells were able to prolong thesurvival of cultured leukemic cells through different factors, not only solublefactors, but also cell-cell interactions. In an attempt to determine which are thefactors involved in the protective effect mediated by accessory leukocytes, weperformed cultures in the presence of neutralizing antibodies (Ab) directed to IL-4, IFNγ or IL-10, as well as blocking Ab to CD40. We found a marked heterogeneityamong different patients, suggesting that the mechanisms involved in theregulation of apotosis might differ among B-CLL samples. In addition, it isconceivable that an array of factors rather than a single factor may account for theprotective effect exerted by monocytes and NK cells. The anti-apoptotic effect was also observed when B-CLL cells and non-malignant Ieukocytes were cultured in the presence of immune complexes (IC). Inthis case, IC were able to inhibit,not only spontaneous apoptosis, but also the oneinduced by different chemotherapeutic agents, like fludarabine, chIorambuciI ordexamethasone. Thus, the activation of monocytes and NK cells by their FcγRcrosslinking, may favor the accumulation of the leukemic clone. Taking into account that B-CLL cells over express the anti-apoptotic protein Bcl-2 and its expression was inhibited in vitro during the culture, we analized theexpression of Bcl-2 in leukemic cells cultured with or without accessoryleukocytes. Our results showed that the presence of monocytes and NK cellsdelays Bcl-2 down-regulation. However, when the cultures were done with IC, Bcl-2seems not to be involved in the protective effect exerted by accessory cells. The last part of the current Thesis involves the study of the expression andfunctionality of FCyRexpressed by leukemic cells. We here present that B-CLLcells express no only FcγRIIb,found on normal B cells, but also FcγRIIa. whichhave ITAM domains related to activating signals. Surprisingly, neither the ICinteraction with FeyRs on B-CLL cells, nor the FCγRIIa crosslinking with specific Ab, could modulate leukemic cells apoptosis or activation, measured by calciummobilization. Our results suggest that FcγRIIa expressed on B-CLL cells may notbe functional.
Fil: Gamberale, Romina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.