Regulación de la esteroidogénesis Adrenal : Efectos de endotelina y ACTH, y Rol de la 11beta-Hidroxiesteroide Deshidrogebnasa

• Autores: Romero, Damián Gastón
• Año de publicación: 1999
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Cozza, Eduardo Néstor
• Materia: ADRENAL; ESTEROIDOGENESIS; ENDOTELINA; ACTH; 11BETA-HIDROXIESTEROIDE DESHIDROGENASA; ADRENAL; STEROIDOGENESIS; ENDOTHELIN; ACTH; 11BETA-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Este trabajo pretende dilucidar algunos de los mecanismos regulatorios de laesteroidogénesís adrenal por Endotelina (ET) y Adrenocorticotrofina (ACTH) y el rol dela 11β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (11β-HSD). Con este fin se obtuvieron lossiguientes aportes: Adrenales de ratas infundidas con ET presentan, además del efecto corticoidogénico yaconocido, a) un incremento de la captación del sustrato primario para laesteroidogénesís, colesterol, in vitro; este incremento es mediado por los receptores ETB. b) un incremento en la actividad del citocromo P-4505scc, mediado por los receptores ETA. La actividad de la 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa no se modifica por ET. La glándula adrenal de rata y vaca expresa actividad de las isoformas l y 2 de la 11β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (11β-HSD). Ambas isoformas presentancaracterísticas bioquímicas y cinéticas similares a las halladas en otros órganos de rata yen otras especies. En ratas, el tratamiento agudo con ACTH in vivo produce una disminución de laactividad adrenal de esta enzima, mientras que el tratamiento crónico (48 hs) causa unaumento de la misma. Este último incremento es mediado por un aumento en los nivelesproteicos de la 11β-HSD-2 aunque no se modifican los niveles de su mRNA. Se proponeun modelo de regulación de la esteroidogénesís adrenal por la actividad de la 11β-HSD. El tratamiento agudo con ACTH de células dispersas de fasciculata adrenal de rataproduce una disminución de la actividad de 11β-HSD determinada en células enteras oen sus microsomas. Esta regulación sería mediada por la vía de cAMP-PKA ya que esrevertida por inhibidores de esta kinasa y simulada por db-cAMP. Además, la presenciade fosforilaciones/desfosforilaciones se comprueba con experimentos con fosfatasaalcalina. Se realizó el clonado, expresión y caracterización de la 11β-HSD-2 bovina. Seestudiaron las características bioquímicas y cinéticas de la proteína expresada en células CHOP. La comparación estructural, cinética y funcional de la 11β-HSD-2 bovinademuestra estrecha similitud con su contraparte de rata y humana.
This work is focused on elucidation of some of the regulatory mechanisms of endothelin (ET)- or adrenocorticotrophic hormone (ACTH)- mediated adrenal steroidogenesis andthe role of 11β-hydroxysteroid dehydrogenase (11β-HSD). To this propouse thefollowing contributions were obtained: Adrenal glands from ET-infused rat shows, besides the well-known corticosteroidogeniceffect, a) increase of cholesterol uptake (cholesterol is the primary substrate forsteroidogenesis); this increment is mediated through ETB receptors. b) Increment ofcytochrome P-450scc activity, which is mediated by ETA receptors. ET does not modify 3l3-hydroxysteroid dehydrogenase activity. Rat and bovine adrenal gland expresses isoforms l and 2 of 11β-hydroxysteroiddehydrogenase (11β-HSD) activity. Both isoforms present biochemical and kineticcharacteristics similar to that reported for other rat organs and animal species. Treatment of rats with ACTH (acute experiment) produces a decrease in adrenal activityof this enzyme, while chronic treatment (48 hs) causes an increase. This last increment ismediated by an increase in 11β-HSD-Z protein levels although 11β-HSD-Z mRNAlevels were not modified. A model for regulation of steroidogenesis by 11β-HSD isproposed. Acute ACTH treatment of dispersed rat fasciculata adrenal cells causes a decrease in 11β-HSD activity measured in whole cells or in their microsomes. The cAMP-PKApathway mediates this regulation as it is reverted by inhibitors of this kinase andmimicked by db-cAMP. Also, the existence of phosphorylation/dephosphorylationprocess is proved by experiments with alkaline phosphatase. Cloning, expression and characterization of bovine 11β-HSD-2 were carried out. Biochemical and kinetic properties of this enzyme were studied in CHOP cellsexpressing bovine 11β-HSD-2. Structural, kinetic and functional comparisons of bovine 11β-HSD-2 show a high degree of similarity with its rat and human counterparts.
Fil: Romero, Damián Gastón. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.