Estudio de la diversidad genética en poblaciones de Babesia bigemina de diferentes regiones geográficas.

Autores
Thompson, Carolina Soledad; Thompson, Carolina Soledad
Año de publicación
2013
Idioma
español castellano
Tipo de recurso
tesis doctoral
Estado
versión aceptada
Colaborador/a o director/a de tesis
Mangold, Atilio José
Guerrero, Sergio
Venturini, Cecilia
Jacobsen, Mónica
Descripción
Fil: Thompson, Carolina Soledad. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina.
La babesiosis bovina es una enfermedad enzoótica causada por protozoarios Apicomplexa del género Babesia. En Argentina, esta enfermedad es provocada por B. bovis y B. bigemina, ambas trasmitidas por la garrapata Rhipicephalus microplus. La caracterización molecular de B. bigemina permitiría realizar estudios epidemiológicos, desarrollar pruebas para diagnóstico y sintetizar vacunas. En este trabajo se seleccionaron clones biológicos a partir de una cepa patógena y una cepa atenuada de B. bigemina, ambas adaptadas a la multiplicación continua in vitro, utilizando diluciones límite. Estos clones fueron útiles para establecer la constitución genética de aislamientos y cepas de referencia, comparar clones con diferente fenotipo de virulencia, evaluar marcadores moleculares, y caracterizar aislamientos silvestres. Se compararon los genes 18S rARN, rap1c y gp45 y las regiones intergénicas ITS y diferentes secuencias repetitivas en clones y cepas silvestres. El gen gp45 no pudo utilizarse debido a la falta detección en una cepa y las regiones ITS mostraron elevado polimorfismo. Sólo 3 ms y 1 MS permitieron diferenciar clones con diferentes genotipos. Estos marcadores permitieron agrupar clones y cepas por su fenotipo de virulencia. El análisis de las secuencias de los genes 18S rARN y rap1c de los clones biológicos, confirmó que ciertas subpoblaciones de Babesia prevalecen durante la adaptación in vitro. En conclusión, los clones y los marcadores moleculares seleccionados permitieron establecer la diversidad existente entre cepas obtenidas de diferentes regiones de Argentina y de otros países. Este trabajo establece la base para definir la importancia de la patogenia de B. bigemina en infecciones naturales.
Bovine babesiosis is an enzootic disease caused by Apicomplexa protozoa from Babesia genus. In Argentine, the etiological agents are Babesia bovis and Babesia bigemina, both transmitted by Rhipicephalus microplus. Studying the biology and the intraespecific genetic variations of B. bigemina from Argentinean and other region strains has become an easy task after the development of continuous in vitro multiplication for these parasites. The studies were based on the use of strains and clones which patogenicity level was established in vivo. Clones were obtained by the limiting dilution technique and showed similar in vitro multiplication efficiency and the same phenotype as their parental strains. 18S rRNA, rap1c, gp45, ITS genes and repeat sequences were compared. The 18S rRNA gene allowed strains differentiation by using punctual mutations visualized in the secondary structure of E23-1 helix. Individually, rap-1c gene was used to identify strains associated to patogenicity, confirmed with HRM technique. Differences existing between not geographically related strains were identified by using 18S rRNA and repeat sequences. Finally, the population selection after the strains adaptation to the in vitro growth was confirmed through the simultaneous analysis of 18S rRNA and rap1c sequences from clones. As a conclusion, clones and molecular markers selected allowed to establish the diversity among different Argentinean regions and among these and foreign strains. Differences between the virulence of the strains helped us to gain knowledge of the patogenicity from B. bigemina natural isolates.
Instituto de Tecnología Agropecuaria
Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica
Materia
Apicomplexa
Babesia bigemina
Molecular markers
Biological clones
18S rRNA
Apicomplexa
Babesia bigemina
Marcadores moleculares
Clones biológicos
18S rRNA
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
http://bibliotecavirtual.unl.edu.ar/licencia.html
Repositorio
Biblioteca Virtual (UNL)
Institución
Universidad Nacional del Litoral
OAI Identificador
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La babesiosis bovina es una enfermedad enzoótica causada por protozoarios Apicomplexa del género Babesia. En Argentina, esta enfermedad es provocada por B. bovis y B. bigemina, ambas trasmitidas por la garrapata Rhipicephalus microplus. La caracterización molecular de B. bigemina permitiría realizar estudios epidemiológicos, desarrollar pruebas para diagnóstico y sintetizar vacunas. En este trabajo se seleccionaron clones biológicos a partir de una cepa patógena y una cepa atenuada de B. bigemina, ambas adaptadas a la multiplicación continua in vitro, utilizando diluciones límite. Estos clones fueron útiles para establecer la constitución genética de aislamientos y cepas de referencia, comparar clones con diferente fenotipo de virulencia, evaluar marcadores moleculares, y caracterizar aislamientos silvestres. Se compararon los genes 18S rARN, rap1c y gp45 y las regiones intergénicas ITS y diferentes secuencias repetitivas en clones y cepas silvestres. El gen gp45 no pudo utilizarse debido a la falta detección en una cepa y las regiones ITS mostraron elevado polimorfismo. Sólo 3 ms y 1 MS permitieron diferenciar clones con diferentes genotipos. Estos marcadores permitieron agrupar clones y cepas por su fenotipo de virulencia. El análisis de las secuencias de los genes 18S rARN y rap1c de los clones biológicos, confirmó que ciertas subpoblaciones de Babesia prevalecen durante la adaptación in vitro. En conclusión, los clones y los marcadores moleculares seleccionados permitieron establecer la diversidad existente entre cepas obtenidas de diferentes regiones de Argentina y de otros países. Este trabajo establece la base para definir la importancia de la patogenia de B. bigemina en infecciones naturales.
Bovine babesiosis is an enzootic disease caused by Apicomplexa protozoa from Babesia genus. In Argentine, the etiological agents are Babesia bovis and Babesia bigemina, both transmitted by Rhipicephalus microplus. Studying the biology and the intraespecific genetic variations of B. bigemina from Argentinean and other region strains has become an easy task after the development of continuous in vitro multiplication for these parasites. The studies were based on the use of strains and clones which patogenicity level was established in vivo. Clones were obtained by the limiting dilution technique and showed similar in vitro multiplication efficiency and the same phenotype as their parental strains. 18S rRNA, rap1c, gp45, ITS genes and repeat sequences were compared. The 18S rRNA gene allowed strains differentiation by using punctual mutations visualized in the secondary structure of E23-1 helix. Individually, rap-1c gene was used to identify strains associated to patogenicity, confirmed with HRM technique. Differences existing between not geographically related strains were identified by using 18S rRNA and repeat sequences. Finally, the population selection after the strains adaptation to the in vitro growth was confirmed through the simultaneous analysis of 18S rRNA and rap1c sequences from clones. As a conclusion, clones and molecular markers selected allowed to establish the diversity among different Argentinean regions and among these and foreign strains. Differences between the virulence of the strains helped us to gain knowledge of the patogenicity from B. bigemina natural isolates.
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