Breve historia bioquímica de una enzima crucial para el metabolismo energético de arañas: del gen a la estructura cristalina - García, Carlos Fernando (2017)
El análisis de un transcriptoma nos permite visualizar los genes que se están expresando de manera temporal y tejido-específica y con ello tener un panorama claro de las vías metabólicas que están activas en dicho tejido. En el presente trabajo luego de realizar un minitranscriptoma de músculo de la araña Polybetes pythagoricus se obtuvieron unos 400 ESTs (etiquetas de secuencias expresadas) de una librería de cDNA, de los cuales, 60 han mostrado similitud con otras secuencias (algoritmo BLASTX). Se han obtenido 20 contigs (secuencia de ADN con regiones solapadas de un gen en particular) uno de los cuales fue el correspondiente a la enzima arginina quinasa (AK), la cual es una enzima crucial para el metabolismo energético de los invertebrados y se describe como un alérgeno potente para los seres humanos. Se completó el gen de AK mediante amplificación rápida de extremos de ADNc (RACE) para generar una secuencia de 1068 nucleótidos (GenBank MF001441) que codifican una proteína de 384 aminoácidos. La secuencia muestra una gran similitud con otras AK de artrópodos. La AK se sobre expresó en cultivos bacterianos y se purificó a homogeneidad por IMAC. Las constantes cinéticas fueron: constante de Michaelis-Menten 1.7 mM, velocidad máxima 27.77 μmol.min-1.mg de proteína-1 y constante catalitica 75 s-1. Finalmente se obtuvo la estructura cristalina de la AK (desconocida para el orden Araneae) y mediante difracción de rayos X se elucidó el sitio de unión a substrato (PDB 5U8E y 5U92). Este trabajo abre diferentes perspectivas del uso de la bioquímica en arácnidos.