Caracterización morfofuncional de células madre de tejidos dentales en cultivo : Bioestimulación con láser. Ensayo “in vitro" - Merino, Graciela Mónica (2019)
Los objetivos de este trabajo fueron: Caracterizar morfológica y funcionalmente células madre mesenquimales (CMM) de pulpa, evaluar distintos métodos de cultivo y establecer un método de irradiación con laser de las células cultivadas. Se utilizaron terceros molares obtenidos en el Hospital Universitario con consentimiento del paciente y aprobación de Comité de Bioética de la FOLP-UNLP. Extraídas las piezas, se trasladaron al Laboratorio de Biología Molecular y Biotecnología de la FOLPUNLP. Se ensayaron distintos métodos de obtención y aislamiento de células: 1. digestión enzimática 2. obtención de explantos. Las células fueron caracterizadas mediante el estudio de marcadores de superficie específicos de CM, como CD73, CD90, CD105 y CD146 por citometría de flujo (Citometer BD FAC SCalibur), se estudiaron morfológicamente las células mediante MET y microscopio invertido con contraste de fases (Leica mod.DM IL LED). Posteriormente se cultivaron 5x 10 4 células en cada placa de Petri de 35 mm de diámetro (día 0). Luego de 24 horas (día 1) las placas fueron divididas en 3 grupos: G1.8: se aplicó densidad energética de 1.79 J/cm2,G3.6: se aplicó densidad energética de 3.57 J/cm 2,GC: Sin irradiación. Se utilizó laser diodo de 940 nm, con potencia regulada a 1W a t:48 y 72 hs. Morfológicamente se evidenciaron mitocondrias, vesículas y gránulos de secreción. En cultivo se observaron colonias de células fusiformes y estrelladas, formando agregados. La caracterización fenotípica por citometría de flujo para marcadores CD73, CD90, CD105 y CD146 resulto positiva. El método de irradiación con laser pudo adaptarse a los procesos de cultivo utilizados en el laboratorio. Se ha puesto a punto un eficiente método de obtención de CMM dentales, y podemos concluir que el mejor método para obtención, aislamiento y expansión es el del explanto. La morfología celular es un buen indicador de la calidad y desarrollo del cultivo.