α-L-ramnosidasa de Acrostalagmus luteo-albus: optimización de la producción, purificación y caracterización - Fernández, María Elena (2010)
En la actualidad los procesos enzimáticos han ido reemplazando algunos de los procesos químicos tradicionales, por cuestiones económicas, ecológicas o por especificidad. Debido al potencial de la ramnosidasa alcalina de Acrostalagmus luteoalbus para la hidrólisis enzimática de flavonoides, para el presente trabajo se plantearon los siguientes objetivos: 1) Estudios de la producción de la α-L-ramnosidasa de A. luteo albus en medios complejos y semi-sintéticos. 2) Selección de un medio de cultivo adecuado para la producción de α-Lramnosidasa. 3) Estudio de represión catabólica por carbono. 4) Purificación de la proteína con actividad ramnosidasa empleando métodos de concentración por liofilización, sistemas cromatográficos y electroforéticos. 5) Determinación de las propiedades cinéticas y bioquímicas relevantes (pH y temperatura óptimos, efecto de cationes sobre la actividad enzimática, PM, pI, huella peptídica) 6) Determinación de la capacidad de las ramnosidasas para hidrolizar flavonoides como naringina, hesperidina y quercitrina en condiciones alcalinas. 7) Caracterización proteómica de la enzima. Secuenciación para su posterior clonado. 8) Obtener adiestramiento en el manejo de técnicas de laboratorio e integrarse adecuadamente a grupo de trabajo.