Obtención de extractos y fracciones bioactivas de “chirimoya”, Annona cherimola Mill. (Annonaceae) : Determinación de parámetros fisicoquímicos, cromatográficos y actividad con nanopartículas biodegradables con anticuerpos monoclonales en su superficie (penetran células de LLC-B) como una nueva posibilidad terapéutica - Haag, Griselda Octavia (2021)
Identificación botánica: • Annona cherimola Mill (Annonaceae) “Chirimoya”: un ejemplar de herbario, fue depositado en el Museo de Botánica y Farmacognosia “Carlos Spegazzini”: LPE1165. Reserva de exsicata. • Descripción botánica: reconocimiento taxonómico, descripción de la hoja macroscópica y microscópica con identificación de elementos histológicos y reacciones histoquímicas con formaron cristales característicos de diagnóstico como constituyentes, base para un futuro control de calidad. Elaboración de extractos: • Elaboración de infusión de las hojas de A. cherimola. • Elaboración de extractos de las hojas de A. cherimola. • Elaboración de extracto DCM de las hojas de A. cherimola. • Ensayos fitoquímicos sobre los diferentes extractos: - Extracto metanólico, extracto acuoso y fracción n-butanólica se caracterizó la presencia de polifenoles, flavonoides. Se reporta por primera vez, en esta especie utilizando distintos sistemas de TLC, la presencia de ácido cafeico, 2 flavonoides: rutina y isoquercetina, todos confirmados por UHPLC. - Fracción n-butanolica: reacción de caracterización de saponinas. - Extracto cloroformo 2: se caracterizó la presencia de alcaloides. - Extracto DCM se caracterizó la presencia de terpenoides, esteroides Se reporta por primera vez, en esta especie utilizando distintos sistemas de TLC y UHPLC, la presencia de terpenoides: ácido ursólico y ácido oleanólico. Ensayos in vitro de la actividad antineoplásica de extractos: Ensayos in vitro de la actividad antineoplásica de los diferentes extractos y fracciones obtenidas para selecciónar el más activo, en estirpes celulares de LLC-B, resistentes a terapias habituales. Mostrando actividad de 68% a una dilución 1/512 Los linfocitos normales no son afectados significativamente por estos extractos sugiriendo un alto nivel de selectividad y seguridad biológica de los mismos. Realizados en el INCUCAI Realización Nanoliposomas: Realización de NLP cargados con infusión de A. cherimola con/sin anticuerpos monoclonales específicos anti-CD20 en células de LLC-B resistentes a fármacos habituales. • NLP sin anticuerpo monoclonal marcado con Rodamina realizados en UNQ Lab. De Biomembranas. • NLP recubiertos con anti-CD20 marcado con Rodamina realizados en Centro de Research Clinique Hayen, Hospital Saint Louis. Pruebas de caracterización NLP: tamaño, potencial, cuantificación de los Fosfolípidos de los liposomas, penetración a distintas concentraciones. Ensayos in vitro de la actividad antineoplásica de Nanoliposomas: • Actividad Citotoxicidad de NLPs con “Chirimoya” contra células de LLC-B, tanto sin tratamiento, como células resistentes a Fludarabina; además de baja toxicidad en PBMCs de donantes sanos. • Actividad apoptótica promedio de 68% (NLP sin anticuerpo) y 71% (NLP con anticuerpo) a diluciones 1/1024 y baja toxicidad en PBMCs de donantes sanos. Concluyendo • Se avanzó en el conocimiento botánico y fitoquímico de esta especie encontrando elementos característicos para su correcta identificación. Y se describieron por primera vez la presencia de ácido cafeico, rutina, isoquercetina, ácido ursólico y ácido oleanólico. Considerando los resultados de los ensayos biológicos realizados, es lógico suponer que la actividad de los extractos de hojas de A. cherimola sería el producto de una acción sinérgica entre las acetogeninas presentes y compuestos encontrados. • Con los extractos obtenidos a partir de Annona cherimola, se investigó la actividad antitumoral in vitro sobre linfocitos B de voluntarios sanos y en enfermos de LLC-B, determinandose que el extracto acuoso presenta la mayor actividad. • Se evaluó la internalización de los nanoliposomas dentro de los lifocitos B de los pacientes enfermos y la actividad apoptótica resultantes mediante microscopía confocal. • Desde el punto de vista técnológico moderno e innovador se encapsuló el extracto acuoso de Annona cherimola en nanoliposomas con anticuerpo monoclonales (forma farmaceutica nanoparticulada) con gran especificidad y seguridad, selectivos para dirigir este sistema de adminitración (delivery) de fármacos a su células blanco, en este caso Linfocitos B. Para maximizar los efectos terapéuticos y minimizar los efectos secundarios, que combinados con los tratamientos clásicos, podrían tener un efecto sinérgico beneficioso, presentandose como una estrategia prometedora para una patología que no dispone de un desarrollo técnologico suficiente para las necesidades actuales.