Evaluación de un método colorimétrico para el estudio de la interacción entre micoorganismos y células de epitelio intestinal - Hugo, Ayelén Amelia (2003)
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la aplicabilidad de la determinación colorimetries de la actividad nitrato reductasa microbiana para estudiar la asociación de microrganismos con enterocitos humanos en cultivo (linea Caco-2). El nitrito producido luego de la incubación de las suspensiones bacterianas con una solución de nitrato- formiato fue evaluado mediante una reacción de diazotación-copulación con ácido sulfanílico y cloruro de N-naftil- etilen diamonio. Se observó una relación bifásica entre la concentración bacteriana y la concentración de nitrito producida. Esta respuesta particular podría ser atribuida al carácter sigmoideo de la cinética de reducción de nitrato y hace que sea necesaria la modificación de los métodos de cálculo. La asociación bacteriana con células Caco-2 se mostró dependiente de la cepa encontrándose los mayores valores para Staphylococcus aureus ATCC 25923. Para algunas cepas, los porcentajes de asociación calculados en base a la actividad nitrato-reductasa fueron significativamente mayores que los calculados en base a recuentos de microorganismos viables. Los resultados del presente trabajo muestran que la asociación de microorganismos con enterocitos humanos en cultivo puede ser evaluada a través do la medición de la actividad nitrato reductásica, siempre que para los cálculos se tengan en cuenta la relación bifásica entre la concentración bacteriana y la concentración de nitrito.