Efectos de la protección mediada por la producción de interferón gamma en células bovinas estimuladas por Neospora caninum - Bacigalupe, Diana Raquel (2007)
El objetivo de este trabajo fue analizar la respuesta inmune mediada por células en la infección por Neospora caninum a través de la utilización de un modelo in vitro. Se obtuvieron células esplénicas de bovinos serológicamente negativos a N. caninum y se estimularon con taquizoítos de la cepa NC-1 de N. caninum vivos (tratamiento Gl), inactivados con formol y calor (tratamiento GF) y con productos de su lisado (tratamiento GS), dejando células sin estimular como controles (GC). En los sobrenadantes de estos cultivos se determinó la concentración de interferon gamma (IFNy) mediante una prueba de ELISA comercial (Bovigam™), resultando en todos los casos negativos con respecto al testigo provisto por el equipo. Se obtuvieron las células esplénicas, se tiñeron con Giemsa y se observaron para la detección de cambios morfológicos. Las células de los grupos Gl y GS mostraron cambios compatibles con activación celular, mientras que en las células del tratamiento GF no se observaron cambios. Se incubaron cultivos de monocitos bovinos (BM) con los sobrenadantes de los diferentes tratamientos de las células esplénicas, los que se desafiaron con taquizoitos de N. caninum. En las células BM cultivadas con los sobrenadantes de los tratamientos Gl, GS, y GF se observaron diferencias en la multiplicación del parásito. Las células se tiñeron para determinar el porcentaje de áreas de lisis en cada tratamiento con respecto al área total, utilizando el programa Image Pro Plus. Los resultados fueron: tratamiento Gl 3,66 %, GF 7,98 %, GS 10,70 % y GC 16,67 %. Se observaron diferencias significativas entre los grupos (x2 p< 0,001). Para determinar la producción de IFNy en las células esplénicas cultivadas, se obtuvo el ADN específico a partir del ARN mensajero y se realizó la prueba de RT-PCR. Los productos amplificados provenientes de las células de los tratamientos Gl y GS revelaron bandas de 261 pb específicas. Se concluye que el lisado de taquizoitos de N. caninum vehiculizado con un adyuvante adecuado sería una alternativa eficiente para la inmunoprofilaxis de la neosporosis.