Estudio de la capacidad antifúngica de levaduras del kefir y su potencial como agente de biocontrol en maíz - Moure, María Candela (2023)
El kefir es una bebida fermentada que contiene microrganismos probióticos, la cual se obtiene colocando gránulos de kefir en un sustrato adecuado. Los gránulos de kefir son un consorcio de bacterias y levaduras inmersas en una matriz de exopolisacáridos. El objetivo de esta investigación fue el aislamiento e identificación de levaduras a partir de kefir de diferente origen para la evaluación de la capacidad antifúngica frente a Aspergillus spp. y Fusarium graminearum, y la caracterización de rasgos relacionados con la virulencia, con el fin de una posible aplicación en maíz. Usando RFLP de la región ITS1/ITS2 y genes específicos, secuenciación de la región D1/D2 y técnicas RAPD, se identificaron 25 aislamientos del kefir como Geotrichum candidum, Pichia kudriavzevii, P. membranifaciens, Saccharomyces cerevisiae, Candida ethanolica y C. boidinii. Se evaluó su capacidad antifúngica por la reducción de la germinación de conidios, lo que permitió seleccionar ocho aislados con alta a moderada reducción de la germinación de conidios frente a A. flavus y A. parasiticus. Además, estos aislados seleccionados mostraron inhibición del crecimiento por contacto en el ensayo de cultivo dual para ambas especies de Aspergillus y de F. graminearum y 3 de ellos ‒pertenecientes a las especies S. cerevisiae y P. kudriavzevii‒ generaron compuestos orgánicos volátiles que afectaron significativamente el crecimiento de los hongos. Adicionalmente se observó un efecto sobre la producción de deoxinivalenol por parte de F. graminearum al ser coincubados en medio PDA en placas de Petri y se determinó la capacidad de capturar aflatoxina B1 en buffer PBS. Para la evaluación de los rasgos relacionados con la virulencia, se analizó el crecimiento a altas temperaturas, las actividades enzimáticas, la resistencia al pasaje gastrointestinal simulado y la adhesión a células Caco-2. Los aislamientos no presentaron más de un rasgo positivo relacionado con la virulencia simultáneamente. En particular, es importante resaltar que la capacidad de adhesión al modelo de barrera intestinal fue extremadamente baja para todos ellos. De acuerdo con los resultados obtenidos, se procedió con el estudio de la actividad antifúngica contra A. flavus de los aislamientos aplicados a maíz molido en condiciones de minisilo. En donde se evidenció que los aislamientos pertenecientes a G. candidum y S. cerevisiae tuvieron un efecto sobre el crecimiento del hongo filamentoso, de acuerdo al recuento en placa y PCR cuantitativa, y sobre la producción de aflatoxinas. Por otro lado, cuando se empleó el kefir de agua entero se obtuvo un mayor efecto antifúngico. Cabe destacar la importancia del estudio del comportamiento de los aislamientos individuales que conforman el consorcio, dado que la variabilidad inherente al mismo complejiza su aplicación como agente de biocontrol.